蛋白纯化专题#8：标签蛋白纯化简介

​大家好，我是ӒKTA的小Ӓ，这周又和大家见面啦。今天我们来看一看基本上每个实验室都在用的蛋白纯化方法——标签蛋白的纯化吧~

说起标签蛋白纯化，相信大家都不会陌生。亲和层析是一种具有特异性的层析技术，亲和层析能够完成一般方法很难完成的分离任务，经常一步纯化就可以达到>90%的纯度，它具有高选择性，高分辨率，高结合载量等优点，所以受到大家的普遍喜爱。亲和层析中，对于携带标签的重组蛋白的纯化是其一类重要的应用。

常用的标签有His，GST，MBP，Strep(II)等等，每种标签都有自己的特点。GE为重组标签蛋白的纯化提供了多种有效的层析填料。

在纯化蛋白之前我们最关心的当然是纯化蛋白的表达，如果蛋白都没有有效表达或者表达量较少，肯定会直接影响到后面的纯化实验。

重组蛋白表达体系包括一个包含了适合的启动子，相关的调控序列和重组蛋白基因序列的载体。一般都是使用商业化的载体，在选择载体时需要考虑到是适用于原核还是真核的体系，纯化产物的规模，重组蛋白的用途等等。

在进行纯化蛋白的表达之前，选择合适的宿主系统非常的重要。许多系统可以适用于纯化蛋白的表达之中，包括细菌，酵母，植物，真菌，昆虫和哺乳动物细胞等等。每一个宿主细胞都有自己的优势和劣势，所以在构建表达载体之前需要慎重考虑。

在选择宿主系统时，应该考虑到纯化产物的规模和纯度，蛋白的完整性以及潜在的毒性。例如，如果构建的重组蛋白具有翻译后修饰，就不能选择细菌表达体系。

同时，蛋白表达的位置也会影响到蛋白纯化的选择。例如，如果选择细菌宿主，有些蛋白可能会在胞内表达，有些蛋白可能会被分泌到胞外。如果目标蛋白在胞内表达，那么在纯化时需要考虑到要去除大量的杂质蛋白以得到比较纯的目标蛋白。如果目标蛋白被分泌到胞外，杂质蛋白可能会比较少，但是，新手同学们需要注意了，如果你的培养基中含有EDTA的话，是不能直接上Ni柱的。这是因为EDTA会螯合Ni柱上Ni离子，会在洗脱时把Ni柱上结合的Ni一起洗脱下来。

纯化重组蛋白有很多标签可以选择。最常用的标签是(histine)6组氨酸标签；其他重要的标签还有GST和MBP，都是蛋白质类型的标签；另外还有商业化的标签Strep-tag II。对于这些标签，GE提供了很多类型的纯化产品，例如预装柱，填料，小型离心柱，重力柱，带有标签的磁珠等等，大家可以根据需要来选择不同的产品。

表2.四种常见标签的特性

今天的介绍就到这里啦，下周我们会详细介绍

His标签蛋白纯化，请大家继续关注哦~

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