分子筛使用大揭秘

说到分子筛，大家一定都不陌生。分子筛又叫做凝胶过滤层析柱，可以利用蛋白分子大小的特性对蛋白样品进行纯化。分子筛在使用方面又有哪些值得我们注意的小Tips呢？一起来看看吧。

01

1.     连接层析柱之前，检查系统管路、阀门已经排除气泡；确认顶端的接头锁（locking ring（下图箭头所指黑色部分）已经处于按压下的状态）；

2.     经过层析柱的所有溶液需要进行脱气并用0.22 μm滤膜过滤；

3.     设置系统报警压，注意不要超过层析柱耐受的最大压力（ 压力参数详见产品说明书）；

4.     低流速（建议以最大流速的一半流速）连接层析柱，注意液液相接；

5.     先用脱气的去离子水低流速平衡层析柱至少一个柱体积；

6.     再用平衡缓冲液低流速平衡层析柱至少一个柱体积。

02

层析柱在运输中会接一个storage/shipping装置以防止层析柱干掉。柱子平衡于脱气的20%乙醇中。

在保存时，先用去离子水低流速平衡层析柱至少2-4个柱体积；

再用脱气20%乙醇低流速平衡层析柱至少2-4个柱体积；

最后连接storage/shipping装置，进行保存。


 

1.     怎样移除storage/shipping装置

2.     怎样填充storage/shipping装置

3.     怎样连接storage/shipping装置

03

3-5次实验后，建议进行层析柱的清洗。

1. 常规清洗

1）0.5M NaOH或0.5 M乙酸低流速反向清洗1-1.5个柱体积；

2）立即用平衡缓冲液低流速反向冲洗层析柱至少2个柱体积；

3）依次用去离子水和20%乙醇低流速反向冲洗及保存层析柱；

4）下次实验前，低流速平衡层析柱直至UV及pH信号稳定。

2.强力清洗：

1）1M NaOH低流速反向清洗4个柱体积以清除蛋白沉淀，再用脱气去离子水冲洗至少4个柱体积（去除蛋白沉淀、疏水蛋白、脂蛋白等）；

2）30%异丙酵低流速反向清洗1.5个柱体积，再用去离子水冲洗至少2个柱体积，（去除脂类及疏水性极强的蛋白等）；

3）上样1个柱体积的1mg/ml 胃蛋白酶溶液（溶于O. 1 M乙酸，0. 5 M氯化钠），室温过夜或者37度处理1小时，再按照常规清洗方法清洗（去除蛋白沉淀等）；

4）根据不同的样品，可选用其它化学试剂（ 具体可参考层析柱说明书中化学试剂耐受表）

5）下次实验前，低流速平衡层析柱直至UV及pH信号稳定。

04

1．层析柱进气

可能原因：环境温度变化，样品或缓冲液未经过脱气，层析柱连接系统时操作不当

处理方法：用大量脱气去离子水反向低流速冲洗层析柱，直到小气泡被带出（ 冲洗过程建议在系统连接反压阀之后进行）

2.  层析柱内填料干裂

可能原因：保存不当，层析柱漏液/漏气

处理方法：检查层析柱每个连接处，重新拧紧；更换密封圈O-ring ；用脱气去离子水低流速冲洗层析柱直到恢复；测定柱效或重复之前做过的样品，如果柱效变化不大或者对于样品分离的效果影晌不大，则继续使用；否则，建议更换层析柱。

3.  系统反压升高

可能原因：缓冲液及样品未进行过滤、蛋白沉淀和杂质残留、清洗不及时等引起系统在线滤器堵塞、层析柱滤膜堵塞；流速过快；流动相粘性过高；温度降低

处理方法：检查系统，检查在线滤器，从组分收样器开始拧开管线，观察压力变化后找到原因；清洗层析柱；更换层析柱顶端滤膜；移除层析柱顶端2 - 3 mm凝胶，调节adaptor消除顶端死体积。

4.   层析柱柱床胶面下降

可能原因：流速过快，未设置报警压而超压；层析柱干裂

处理方法：长时间低流速反向冲洗层析柱，直到工作流速下胶面恢复adaptor消除顶端死体积；测定柱效或重复之前做过的样品，如果柱效变化不大或者对于样品分离的效果影响不大，则继续使用；否则，建议更换层析柱。