19 年
手机商铺
技术资料/正文
317 人阅读发布时间:2021-06-07 15:24

1月24日,权威医学期刊《柳叶刀》发布的“2019武汉新型冠状病毒临床特点”文章中做了细胞因子和趋化因子的测定,结果发现ICU患者和非ICU患者的初始血浆IL1B,IL1RA,IL7,IL8,IL9,IL10,碱性FGF,GCSF,GMCSF,IFNγ,IP10,MCP1,MIP1A,MIP1B,PDGF,TNFα和VEGF浓度均高于在健康的成年人中。
健康成年人和感染2019-nCoV的患者的血浆IL5,IL12p70,IL15,嗜酸性粒细胞趋化因子和RANTES水平相似。ICU患者与非ICU患者之间的进一步比较表明,ICU患者的IL2,IL7,IL10,GCSF,IP10,MCP1,MIP1A和TNFα的血浆浓度高于非ICU患者,这表明细胞因子风暴与疾病严重程度有关。
目前发现细胞因子风暴的样本包括血清血浆、肺泡灌洗液等样本、也包括鼻咽拭子采样。现阶段的病毒检测主要集中在分子检测阶段,包括荧光定量RT-PCR、新冠状病毒核酸检测试剂盒等分子检测方式,也是现阶段最快速的检测方案。
疫情后,该病毒的研究,一定会进行深入涉及免疫蛋白方面的研究。针对该方向的研究,Elisa做为常规检测方案,无法及时快速准确的获得最终结果。为了避免这种情况,具有“多快好省”特点的多因子检测技术是目前推荐的检测方案。
那么,多因子检测技术有哪些呢?下面小优就给您细细道来:
01
Luminex---xMAP技术
实验原理


技术优势
多重检测:同时检测100种生物靶标
节省样品:只需低至25μL的样品体积
节省时间:实验过程只需4小时
高灵敏度:精确定量下限低至0.1pg/mL
产品推荐

02
MSD---电化学发光检测技术
实验原理
同样的,MSD也是采用了96孔板,不过与Elisa和luminex相比,有很大的不同。

A、每个孔里面会有很多小点(小点数量,会根据板型的不同有变化)

B、板底是石墨电极,有专门的仪器进行读取
检测原理


技术优势
高灵敏度、宽线性范围 :线性范围可达 6log 灵敏度 <0.05~1pg/mL
低样本量:MSD有V-Plex和U-Plex(自由组合)两种形式, V-Plex一块板单孔需求量50μL,而U-Plex一块板单孔需求量可低至25μL
高重复性:板内CV< 6-8%,板间< 10%,批间< 15%
低背景:只有在电化学激发后,检测抗体上的SULFO-TAGTM标记物才能产生光信号
产品推荐

03
CBA
实验原理


技术优势
每个捕获微球都具备优异的特异性,无交叉或非特异性反应
同一个样品可同时定量检测81个因子
具备CBA kit和CBA Flex Kit两种形式,可以根据自身需求自由组合
配对抗体没有自发性荧光,灵敏度和重复性高
PE标记检测抗体,荧光强度较高,信号稳定
产品推荐

04
抗体芯片
实验原理

技术优势
多指标:每张芯片同一样品可同时检测多达数百种指标
多样本适用:细胞培养上清、细胞/组织裂解液、血清/血浆、乳汁、尿液、唾液等
高灵敏度(pg/ml)、高特异性(优异的抗体对)、重复性(2/4个重复)
产品推荐

好了,看完这些技术的介绍,有人会问小优,各类样本怎么处理呢?鉴于此次病毒样品的特殊性,我们Labex暂且接不了此检测服务。
但我们实验室的小哥哥还是基于我们做为多因子检测CRO服务专家的Labex每年十万+的处理样本经验,为科研工作者总结了一些样本处理的小Tips:
样本处理方案
血清:不含抗凝剂的采血管采血,4℃静置2小时(避免震动,防止溶血),离心20min(4℃,3000g),取上清,建议进行两次离心和取上清,建议分装后-80℃冻存,避免反复冻存
血浆:含抗凝剂(EDTA、肝素,具体采取哪种抗凝剂,参考说明书)的采血管采血,需充分混合,离心20min(4℃,3000g),取上清,建议进行两次离心和取上清,建议分装后-80℃冻存,避免反复冻存
肺泡灌洗液:离心10min(13000rpm,4℃),取上清,建议进行两次离心和取上清,建议分装后-80℃保存,避免反复冻存
组织培养上清:离心5min(1000g,4℃),取上清,再离心10min(13000rpm,4℃)取上清,建议分装后-80℃保存,避免反复冻存
其他常规体液:离心10min(13000rpm,4℃),取上清,建议进行两次离心和取上清,建议分装后-80℃保存,避免反复冻存
注:血清血浆从病人处抽取后,务必立即放入4℃保存,避免长时间室温放置,造成因子降解