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25152 人阅读发布时间:2015-10-14 11:21
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一、为什么要进行细胞鉴定?
★ 死细胞带来非特异性染色
★ 会导致背景增高,影响检测数据的灵敏度
★ 死细胞染色影响正常的结果比例
二、Fixable Viability Dye(FVS)与传统染料PI/7-AAD有和区别?
1)PI、7-AAD的问题
PI、7-AAD的染色通常是放在其他抗体孵育完成后进行,不能洗涤即要上机检测;
对于胞内抗体的染色,由于经过了固定步骤,经过PI或7-AAD染色后所有的细胞都是阳性,所以它们只适合胞膜染色的死活细胞鉴定。
而PI、7-AAD与常用染色通道PE PerCP是同一检测通道,二者只能选择其一使用。
PI和7AAD发射谱很很宽,488 nm蓝色激光发射基本上580BP和690BP都被占用,这样大大减小了多色试验中的配色和调补偿的难度
2)Fixable Viability Dye的优点是:
▶ 固定、破膜以及洗涤步骤不影响Fixable Viability Dye的染色
▶ Fixable Viability Dye的光谱多样,适合各种染色组合的搭配。FVS系列有多种,分别对应不同的激光器,发射出不同波长的光,而且发射谱很集中。
三、Fixable Viability Dye使用原理
FVS为氨基反应性染料,与细胞表面或者内部的蛋白不可逆的结合。FVS是染细胞表面或膜内侧的游离胺,活细胞弱阳,死细胞强阳。正是由于和PI 、7-AAD原理不同,所以对于一些需要固定破膜步骤的试验FVS一样适用,如果固定破膜后细胞发生死亡,该染料还是能反应细胞的死活情况,这点是核酸染料所不能替代的。
实验原理图:
实验结果图:
四、订购产品清单
优宁维流式网(www.my-fcm.com.cn) 流式试剂 公众号:流式专家
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