流式常见问题之样本准备

Q & A（流式常见问题及解决方案）

上海优宁维生物科技股份有限公司

1 、Q：实验过程中，除了CBA的分析试剂盒，我们还需要准备什么？
      A： 除了试剂盒中所包含的成份外若要进行CBA分析实验还需要流式液相多重蛋白定量技术分析软件；此软件主要是用于分析您的实验数据，虽然实验数据的分析可以不使用CBA的特定软件，但是由于CBA实验中所采集的数据较为繁杂，若不通过专用的CBA软件进行分析则进行数据分析的时间将显着增加， 此外，用户还需要至少有一个488纳米激光器及3个荧光参数的接收的流式细胞仪。

2、Q： CBA中使用的微球是由什么做的？所使用到的微球的平均半径是多少？
      A： CBA中使用的微球的原料是聚苯乙烯约为7.5um。

3、Q：在CBA分析中我应该使用何种型号的试验管？
      A：  除了FACSArray外, 我们建议使用12x75 mm, 5 ml的聚苯乙烯管(BD Falcon Cat No. 352008)

4、Q：样本制备管的选择需注意什么？
      A： 推荐用聚丙烯管制备样本 不要用玻璃管或器皿 玻璃容器可导致检测信号减低 得出错误的结果。

5、Q：CBA分析中在进行标准曲线的配制时，有什么需要特别注意的地方？
      A： CBA试剂盒中所提供的标准样品是蛋白冻干粉，由于大部份的标准样品，属细胞因子类的敏感型蛋白，在重悬标准样品成溶液或进行标准样品稀释时， 不可采用振动混匀及剧烈吹打的方式处理标准样品，在重悬标准样品成溶液时， 在加入溶液后，只需放于室温下平衡15 分钟即可，在进行标准样品的系列稀释时， 只需轻轻吹打样品数次即可，否则，由于制成溶液后的标准样品不稳定，经剧烈混匀后易降解失活，影响实验中标准曲线的拟制。

6、Q：是不是每次实验都要使用一瓶新的标准品？
      A： 标准品在配成溶液后不稳定， 在配制成溶液的12小时后将不能再使用，在每次实验前都要重新配置新的标准品溶液。

7、Q：为什么振动混合捕获微球这个实验步骤如此关键？
      A： 在使用之前 捕获微球必须充分的振动混合，从微球混合液试管中分到，每一个实验管之前，直至在送到仪器进行上样检测之前反应管都必须充分振动混合， 这是由于充分的振动能够防止微球聚集成团，若混合不足会导致在进行样品分析时候出现检测到很少或者没有检测到微球的情况，因此在使用流式细胞仪分析标准品或者样品 之前，必须充分振荡混合微球，试验管在放置到流式细胞仪上检测前需要振荡混合3-5秒钟，这样在FL3通道里面能够更好的分辨出带有不同标志的微球。

8、Q：CBA操作实验中，哪些步骤需要避光进行？为什么？
      A： 凡涉及检测抗体的相关步骤都需避光操作，这是由于CBA技术是使用藻。红蛋白检测样品的荧光信号 由于使用藻红蛋白报告系统，可使得CBA达到最佳敏感度的分析效果， 因此每步添加了检测试剂后都要避光反应，此外，在加入检测试剂时，除了需避光操作外， 还需严格遵守试剂盒的要求规范操作，比如： 精确的加液，因为添加的微球数量不准确会改变有效捕获面积从而影响检测的敏感性。

9、Q：生物危害性样本怎么处理？
      A： 上流式细胞仪分析样本之前，可用1%的多聚甲醛短暂固定，然而，这可能影响实验结果，需操作者验证。

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