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干货,外泌体研究完整解决方案!

2396 人阅读发布时间:2018-01-24 15:59

外泌体(Exosome)--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

外泌体是由多种类型的细胞,如T、B、NK细胞、以及肿瘤细胞等分泌的一种囊泡状结构,直径在30-100nm之间,又称膜外小体(Extracellular Vesicles, EVs)。外泌体常携带其起源细胞的多种生物分子,包括蛋白质、脂类和核酸,因此,外泌体参与了多种生物学过程,包括免疫监控、血液凝固、神经传递、干细胞维护和组织修复等。

新闻图片1

图1:外泌体形成和作用方式示意图。

【研究难点】-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
调查发现,约有56%的实验室采用超速离心法分离外泌体,但该方法有其局限性:

★耗时耗力:需8-30个小时

★处理样本少:每次最多处理6个样品

★需要大量的起始材料

★产量不高

★由于外泌体体积小(直径30-100nm),流式检测也是一大难题。

新闻图片2
图2:由于外泌体体积小,很难用流式检测到单个的外泌体。检测到的颗粒更像是外泌体群或聚集体。
 
美天旎为外泌体研究而专门研发了相应的试剂盒,提供外泌体完整解决方案。Exosome isolation kit  MACSPlex Exosome Kit,分别用于外泌体的富集和分析。
 
【外泌体磁珠纯化】-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
基于美天旎的MACS技术,利用外泌体表面常见的四次跨膜蛋白CD9、CD63和CD81,分别研发了四款磁珠试剂盒,用于阳性分选外泌体,样本体积最小可至0.5mL
新闻图片3
图3:利用美天旎Exosome isolation kit,简单三步(磁珠孵育、磁场分离、洗脱),1.5h内完成外泌体的纯化。
 
【外泌体流式分析】------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
分析外泌体蛋白的传统方法有western blot、质谱分析、扫描电镜和流式分析。由于外泌体的直径太小(30-100nm),很难通过标准的流式检测方法对其进行分析。为此,美天旎研发了 MACSPlex Exosome Kit, human(#130-108-813) 试剂盒,用于简单、快速的分析外泌体表面37种潜在蛋白
新闻图片4
图4:MACSPlex Exosome Kit原理和步骤示意图。
 
实验案例】-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
利用MACSPlex Exosome Kit对黑色素瘤细胞和结肠癌细胞中的外泌体进行分析。黑色素瘤来源的外泌体都是MSCP+的,但却几乎不表达CD326。同时,流式分析可见,不同肿瘤来源的外泌体表达的抗原标记也是明显不同的。
新闻图片5
图5:利用MACSPlex Exosome Kit对黑色素瘤细胞和结肠癌细胞中的外泌体进行分析。
利用MACSPlex Exosome Kit结合美天旎MACSQuant流式细胞仪预设程序“MACSPlex_Exosome”,能够实现外泌体的全自动检测和分析。
新闻图片6
图6:利用MACSPlex Exosome Kit分析表达不同表面Marker的外泌体分群情况。

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