树突状细胞（dendriticcells，DCs）在免疫应答的首要环节———抗原提呈中扮演着重要的角色，是目前公认的体内功能最强大的专职性抗原提呈细胞（antigen-presentingcell）。它能激活静息型 T 细胞，主要参与细胞免疫和 T 细胞依赖的体液免疫反应，在抗肿瘤免疫应答中起重要的作用。随着 DCs 的免疫治疗进入临床研究，足量、稳定产生有效的 DCs 是技术的关键。
在人外周血中，DCs 占比非常少，使用 CD14 磁珠（CD14 MicroBeads kit）分选单核细胞，体外培养诱导可以获得大量 DCs，也是目前应用最广的一种 DC 获取方式，那实验具体如何开展呢？
Mo-DCs 实验操作步骤
一、人外周血 PBMC 获取：
（1）PBMC 概念：是英文 peripheral blood mononuclear cell 的缩写，中文名叫外周血单个核细胞，是指外周血中具有单个核的细胞，包含淋巴细胞、单核细胞等。
（2）实验材料
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用途 |
货号 |
产品名称 |
规格 |
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将外周血处理成 PBMC |
17144003 |
Ficoll Paque Plus |
6x500 mL |
（3）操作步骤
（4）实验结果：密度梯度离心之后从上到下依次是：血浆-PBMC-Ficoll-粒细胞-红细胞。
二、磁珠分选获得 CD14 单核细胞：
（1）磁珠分选原理：用 MACS® 超顺磁性微珠磁性标记细胞或生物分子，然后在高强度、梯度磁场中，通过MACS® 分选柱分离出目的细胞。
（2）实验材料
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用途 |
货号 |
产品名称 |
规格 |
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分选套装 |
130-090-312 |
MinIMACS Starting Kit |
Kit |
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分选用磁珠 |
130-050-201 |
CD14 MicroBeads, human |
2 mL |
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Buffer缓冲液 |
130-091-221 |
6x1.5 L |
注意：分选套装里面包含：1 个 MiniMACS Separation Unit（分选器）；25 个 MS 分选柱；1 个 MACS MultiStand。
（3）操作步骤
（4）实验结果：分选出的 CD14+ 单核细胞的纯度为 96.8±3.8%，得率为 81.3±8.8%%，活性为 97.5±1.4%。
三、Mo-DCs 体外诱导分化：
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四、Mo-DCs 形态鉴定：
五、Mo-DCs 功能鉴定：
（1）抗原递呈能力：
用 FITC-labeled dextran 评估单核细胞、imMo-DCs 或 mMo-DCs 的胞吞能力。用流式细胞仪检测平均荧光强度（MFI）。结果表明，imMo-DCs 具有最高的抗原提呈能力。
（2）迁移能力检测：
mMo-DCs 具有向 CCL19 迁移的能力，并呈现剂量依赖性。
（3）Mo-DCs诱导naive T细胞增殖的能力：
我们通过混合淋巴细胞反应实验(MLR)，来评估 Mo-DCs 诱导 naive T 细胞的能力：先用 Naive CD4 + T Cell Isolation Kit II 从 PBMCs 分选出 Naive CD4 + T 细胞，再分别与Monocytes, imMo-DCs, mMo-DCs 共培养 7 天，然后检测 CD4 + T 细胞的增殖情况，结果显示：mMo-DCs 能够诱导T细胞增殖。
（4）检测 Mo-DCs 分泌 IL-12 的能力：
用 CD40L 刺激后，对 mMo-DCs 分泌的 IL-12 和 IL-10 进行定量分析。结果表明，在 CD40L 的刺激下，mMo-DCs 分泌 IL-12。
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