【罗工秘籍42】谁说流式不能检测外泌体？

外泌体是什么呢？

外泌体（Exosome）是指直径约为30-150nm，密度在1.13-1.21g/mL的小囊泡。并且其存在于所有的组织、细胞间隙、体液中。

目前对于外泌体的研究越来越广泛，但传统的外泌体下游应用局限于基因水平，而科学家更迫切的需要外泌体在蛋白水平的验证和研究。

是否可以使用流式来鉴定外泌体呢？毕竟流式的优势是快速、高通量、多参数检测，这样有助于我们对外泌体进行更加全面的蛋白水平的分析。那么，我们就来看看如何使用流式来鉴定检测外泌体及评估其功能和来源。

首先，外泌体的大小是非常小的，所以我们在流式检测时的难点主要在于对其进行定位，目前主流有2种方法来进行外泌体的定位及检测：

方法一：微球法
使用FACS beads进行外泌体的捕获，后在流式上检测微球。顾名思义，就是利用仪器可检测到的beads捕获外泌体，上机检测，从而来反映外泌体的情况。这样的好处在于可以精准的检测出外泌体，并且适用于大部分流式细胞仪：

微球法的整体实验流程如下：
通过对外泌体进行微球的偶联，让外泌体变相的成为一种“表抗原”，然后检测表抗原种CD9/CD63等指标的表达，就可以得到外泌体的纯度数据了。

 
微球法的实验结果参考一览：

方法二，直测法
利用一些高精度流式细胞仪可以直接检测外泌体的biomarker，
目前明确已知可以直接检测的仪器：

其实我们的一些常规的流式细胞仪例如BD fortessaX-20可以直测，但是为了区别系统的杂信号，我们需要使用定大小的微球辅助定位：

如下，我们使用已知体积大小的微球来在fsc/ssc上确定外泌体的位置，进一步对具体位置的样本圈门进行流式鉴定：

同样的，利用如上微球和直测等方法，我们也可以来使用流式检测外泌体的功能，我们知道外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肿瘤侵袭等方方面面，所以对于外泌体的biomarker的研究也是现在的一个热点方向。

如下这种方法就是微球法的延申：我们使用德国美天旎公司的 MACSPlex Exosome Kit, human（#130-108-813）来完成外泌体的多参数蛋白水平的检测：

整体流程如下：

我们可以看到不同的biomarker微球吸附了不同来源的外泌体，在流式上微球以矩阵的方式进行排布：

最终我们通过统计每个微球群的平均荧光强度来得到不同指标在当前外泌体样本中的表达水平：

现在知道如何使用流式来检测外泌体了吧？
快点行动起来吧！

上海优宁维生物科技股份有限公司

试剂 | 耗材 | 仪器 | 软件 | 定制 | 实验服务 | 供应链

免费热线：4008-168-068

咨询邮箱：info@univ-bio.com

订购商城：www.univ-bio.com

微信公众平台：优宁维抗体专家，欢迎关注！

小优博士（小程序）：5大课堂, 让你的科研不再难！