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488 人阅读发布时间:2022-05-10 09:44
随着新药物疗法的不断开辟,生物制品(药品)市场的蓬勃发展,抗体药物、重组蛋白药物和疫苗等生物医药产品收到了越来越多的关注。而用于产生治疗用重组蛋白的表达宿主包括昆虫细胞、酵母和细菌。为了模拟人类蛋白质表达条件,越来越多的药企和科学机构正在从大肠杆菌等经典宿主转移到哺乳动物来源的细胞,尤其是中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞系得到了广泛的使用。
宿主细胞蛋白(Host cell protein,HCP)是指病毒性疫苗和基因工程药物中来源于宿主细胞的蛋白成分,包括宿主细胞结构蛋白和转化蛋白(细胞分泌的促生长蛋白)。简言之,就是当我们利用CHO细胞系表达需要的特定蛋白质的时候,CHO细胞也会表达我们不需要的副产物(杂质),这些宿主细胞表达的不相关蛋白不仅有可能诱导机体产生抗HCP抗体,引起过敏反应,还有可能有“佐剂效应”引起机体对蛋白质药物产生抗体。在纯化过程中,大部分的HCP被去除(> 99%),但残留的HCP量仍保留在分布的产品中,当将其引入人体免疫系统时,会存在潜在的安全风险。因而,蛋白质药物中的HCP残留是生物药能否获得监管机构批准的重要因素之一。
新品推出两款即用型的HTRF®和AlphaLISA®免洗检测试剂盒,旨在快速、轻松地检测和量化生物制药过程中的CHO HCP残留。在制药过程中,治疗性重组蛋白,如单克隆抗体、部分疫苗和其他生物制品里,不允许含有宿主细胞蛋白(HCP)残留,以防止有害的免疫副反应或降低药物效力、稳定性及整体有效性。
HTRF CHO HCP DETECTION KIT技术原理
该检测原理是基于HTRF®(均相时间分辨荧光)技术。如下图所示,用Eu(供体)标记抗体和d2(受体)标记抗体。当抗体相互靠近时,用光源(激光或闪光灯)激发供体,触发荧光共振能量转移(FRET),进而在特定波长(665nm)发出荧光。信号强度与形成的抗原-抗体复合物的数量成正比。

实验流程及结果展示

AlphaLISA CHO Host Cell Protein Detection Kit技术原理
生物素化的抗CHO抗体与链霉亲和素包被的AlphALISA供体珠结合,另一抗CHO抗体与AlphaLISA受体珠结合。在CHOHCP存在下,供体微珠和受体微珠相互靠近。供体珠的激发会使得单线态氧释放,从而触发受体珠产生615nm波长信号。

实验结果展示:
Dynamic Range: 0.52 – 3 000 ng/mL

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