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siRNA筛选小文库,确定不来一套试试吗?

507 人阅读发布时间:2022-05-18 11:26

小刀今天踏着七彩祥云,带着siRNA文库来咯~

确实,这不是我第一次叨叨siRNA文库了,只是我实在不忍心这么好的东西还没有被大家看到!

 新闻图片1

所以,无论如何我今天都要当一回优宁维“李佳琦”,全方面给大家展示siRNA文库的功能性、实用性及其可操作性!

 新闻图片2

1.    siRNA文库展现形式:

 新闻图片3

每块96孔板设有80个基因的siRNA,阵列排布于第2列至第11列
第1列和第12列为空,可根据实验需要自行设置相应的对照
TIPs: 小文库基因数大概在100左右,所以到手也就一两块96孔板


2.    siRNA文库溶解稀释方法:

 

 

文库规格 nmol 不同母液浓度,所需添加稀释液体积(ul)
2uM 10uM 20uM
0.1 50 n/a n/a
0.25 125 25 n/a
0.5 250 50 25

用排枪直接将无RNA酶的水添加至96孔板中,稀释至母液浓度
根据实验需求,等分成多块96孔板子板,避免反复冻融
用量:以0.1nmol规格,母液稀释浓度2uM,使用终浓度为25nM为例:96孔板筛选(100ul/孔),每次筛选需进行3个重复,共需用到4ul左右。(可支持约10次筛选)


3.    siRNA文库筛选操作方法:

 新闻图片4

反向转染两步法操作——转染当天配制转染复合物,随后加入细胞悬液
整个过程只需1把排枪和1块96孔板,简直不要太简单奥!


4.    siRNA文库筛选检测方法:
表型变化检测:细胞活力、细胞迁移、细胞形态、细胞周期分析等
mRNA水平检测:qPCR, microarray analysis, northern blotting
蛋白水平检测:western blot, immunofluorescence, FACS analysis


小刀以之前和大家分享过的siRNA去泛素化酶小库为例:

 

筛选应用 期刊 细胞 siRNA使用终浓度 筛选检测方法
筛选潜在乳腺癌治疗靶点 Genes Dev. 2020 MDA-MB-231 10nM Western blot
筛选调节蛋白质内稳态相关基因 Nat Commun. 2021 MRC-5 50nM S9.6 immunostaining signal
筛选与细胞纤毛生成相关基因 Nat Commun. 2018 hTERT-RPE1 10nM 纤毛生成百分比
筛选调节炎性小体活动相关基因 FEBS Lett. 2017 THP-1 40nM ELISA


当然,除了去泛素化酶小库以外,我们还提供各种类型大库、中库、小库和小小库。小刀把它们全部罗列出来,有需要的老师可以联系身边的优宁维销售,还有对应的基因列表供您参考挑选哦~!

 

siRNA文库范围 基因数(Human) 基因数(Mouse)
Genome 全基因组 ~19000 ~20000
Druggable Genome 成药基因组 7553 6457
Drug Targets 药物靶点 4786 5144
Protein Kinases 蛋白激酶 709 742
Epigenetics 表观遗传 463 /
GPCR G蛋白偶联受体 390 571
Ion Channels 离子通道 349 335
Phosphatases 磷酸酶 254 220
DNA Damage Response DNA损伤应答 240 /
Membrane Trafficking 膜运输 140 /
Cell Cycle Regulation 细胞周期调控 131 128
Cytokine Receptors 细胞因子受体 116 /
Tyrosine Kinases 酪氨酸激酶 88 /
Nuclear Receptor 细胞核受体 52 /
Ubiquitin Enzymes 泛素化酶文库包括:
Ubiquitin Conjugation Subset 1 - Cullins, E1, E2, HECT E3 Ligases 87 80
Ubiquitin Conjugation Subset 2 - F-box, SOCS box E3 Ligases 115 103
Ubiquitin Conjugation Subset 3 - RING finger and RING finger-like E3 Ligases 386 329
Deubiquitinating Enzymes 去泛素化酶 98 126


最近siRNA文库大放价,小文库买起来就更划算了喂,确定不来一套试试看吗?

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