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507 人阅读发布时间:2022-05-18 11:26
小刀今天踏着七彩祥云,带着siRNA文库来咯~
确实,这不是我第一次叨叨siRNA文库了,只是我实在不忍心这么好的东西还没有被大家看到!

所以,无论如何我今天都要当一回优宁维“李佳琦”,全方面给大家展示siRNA文库的功能性、实用性及其可操作性!

1. siRNA文库展现形式:

○每块96孔板设有80个基因的siRNA,阵列排布于第2列至第11列
○第1列和第12列为空,可根据实验需要自行设置相应的对照
TIPs: 小文库基因数大概在100左右,所以到手也就一两块96孔板
2. siRNA文库溶解稀释方法:
| 文库规格 nmol | 不同母液浓度,所需添加稀释液体积(ul) | ||
| 2uM | 10uM | 20uM | |
| 0.1 | 50 | n/a | n/a |
| 0.25 | 125 | 25 | n/a |
| 0.5 | 250 | 50 | 25 |
○用排枪直接将无RNA酶的水添加至96孔板中,稀释至母液浓度
○根据实验需求,等分成多块96孔板子板,避免反复冻融
○用量:以0.1nmol规格,母液稀释浓度2uM,使用终浓度为25nM为例:96孔板筛选(100ul/孔),每次筛选需进行3个重复,共需用到4ul左右。(可支持约10次筛选)
3. siRNA文库筛选操作方法:

○反向转染两步法操作——转染当天配制转染复合物,随后加入细胞悬液
○整个过程只需1把排枪和1块96孔板,简直不要太简单奥!
4. siRNA文库筛选检测方法:
○表型变化检测:细胞活力、细胞迁移、细胞形态、细胞周期分析等
○mRNA水平检测:qPCR, microarray analysis, northern blotting
○蛋白水平检测:western blot, immunofluorescence, FACS analysis
小刀以之前和大家分享过的siRNA去泛素化酶小库为例:
| 筛选应用 | 期刊 | 细胞 | siRNA使用终浓度 | 筛选检测方法 |
| 筛选潜在乳腺癌治疗靶点 | Genes Dev. 2020 | MDA-MB-231 | 10nM | Western blot |
| 筛选调节蛋白质内稳态相关基因 | Nat Commun. 2021 | MRC-5 | 50nM | S9.6 immunostaining signal |
| 筛选与细胞纤毛生成相关基因 | Nat Commun. 2018 | hTERT-RPE1 | 10nM | 纤毛生成百分比 |
| 筛选调节炎性小体活动相关基因 | FEBS Lett. 2017 | THP-1 | 40nM | ELISA |
当然,除了去泛素化酶小库以外,我们还提供各种类型大库、中库、小库和小小库。小刀把它们全部罗列出来,有需要的老师可以联系身边的优宁维销售,还有对应的基因列表供您参考挑选哦~!
| siRNA文库范围 | 基因数(Human) | 基因数(Mouse) |
| Genome 全基因组 | ~19000 | ~20000 |
| Druggable Genome 成药基因组 | 7553 | 6457 |
| Drug Targets 药物靶点 | 4786 | 5144 |
| Protein Kinases 蛋白激酶 | 709 | 742 |
| Epigenetics 表观遗传 | 463 | / |
| GPCR G蛋白偶联受体 | 390 | 571 |
| Ion Channels 离子通道 | 349 | 335 |
| Phosphatases 磷酸酶 | 254 | 220 |
| DNA Damage Response DNA损伤应答 | 240 | / |
| Membrane Trafficking 膜运输 | 140 | / |
| Cell Cycle Regulation 细胞周期调控 | 131 | 128 |
| Cytokine Receptors 细胞因子受体 | 116 | / |
| Tyrosine Kinases 酪氨酸激酶 | 88 | / |
| Nuclear Receptor 细胞核受体 | 52 | / |
| Ubiquitin Enzymes 泛素化酶文库包括: | ||
| Ubiquitin Conjugation Subset 1 - Cullins, E1, E2, HECT E3 Ligases | 87 | 80 |
| Ubiquitin Conjugation Subset 2 - F-box, SOCS box E3 Ligases | 115 | 103 |
| Ubiquitin Conjugation Subset 3 - RING finger and RING finger-like E3 Ligases | 386 | 329 |
| Deubiquitinating Enzymes 去泛素化酶 | 98 | 126 |
最近siRNA文库大放价,小文库买起来就更划算了喂,确定不来一套试试看吗?

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