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蛋白纯化常见问题:超滤管

1719 人阅读发布时间:2022-07-04 16:18

1、如何降低离心过程中的蛋白降解?
答:如果样品是线性蛋白,建议您使用较低的离心速度和时间。


2、如何选择超滤管MWCO?
答:推荐选择超滤管MWCO为样品分子量的1/3。


3、蛋白在浓缩时出现了沉淀?
答:浓缩过快或者过度浓缩可能会引起蛋白沉淀。建议蛋白浓缩后最终浓度不超过20mg/ml。降低离心速度并改用截留分子量更大的超滤管。


4、在使用过程中滤膜破裂?
答:如果滤膜干燥可能会引起破裂。超滤浓缩管上有微量甘油和NaN3,在使用前可先润洗去除。如果超滤管预清洗之后没有立即使用,应保存在冰箱里并用缓冲液或水覆盖滤膜表面。


5、超滤管流速较慢?
答:过滤速率受到超滤管MWCO,样品浓度,粘度,离心力和温度的影响。如果样品中固体含量超过5%,离心时间需要增加。
当在4℃下运行时,流速大约比25℃时慢1.5倍。粘性溶液(如50%甘油)的浓缩时间大概是常规溶液的5倍。


6、超滤管是否可以灭菌?
答:超滤管不能进行高压灭菌,可使用70%乙醇溶液或消毒气体混合物来进行灭菌。


7、超滤管是否可以重复使用?
答:受到样品性质的影响。可以考虑用0.2M NaOH清洗,然后用20%乙醇清洗,清洗后应保存在冰箱里并用缓冲液或水覆盖滤膜表面,防止滤膜干裂。


8、超滤管是否可以用于XXX样品?
答:请参见前文超滤管耐受性表格。


9、超滤管是否可以用于脱盐?
答:可以。请参见说明书进行操作。


10、超滤管是否可以反向离心回收样品?
答:Vivaspin 2超滤管可反向离心回收样品,具体操作请参见说明书。

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