单克隆抗体的制备过程介绍

单克降抗体的制备过程

单克隆抗体，是由单一 B 细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。其诞生革新了生物学和医学等领域，为疾病诊断、治疗及科学研究开拓了新方向。​

免疫动物​

这是制备单克隆抗体的起始环节，目的是让小鼠产生致敏 B 淋巴细胞。通常选用 6 - 8 周龄的雌性 BALB/c 小鼠，因其免疫反应特性良好，适合该实验需求。依据预先规划好的免疫方案，对小鼠实施免疫注射。抗原借助血液循环或淋巴循环抵达外周免疫器官，在此刺激对应的 B 淋巴细胞克隆，促使其活化、增殖，最终分化成致敏 B 淋巴细胞。此过程中，抗原如同 “启动钥匙”，开启小鼠免疫系统针对特定抗原的免疫应答，为后续产生所需抗体奠定基础。​

细胞融合​

成免疫阶段后，采用二氧化碳气体使其，随后在无菌环境下取出脾脏。在平皿内通过挤压研磨的方式，精心制备脾细胞悬液。将准备妥当的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞，按照一定比例混合均匀，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇的特殊作用下，各类淋巴细胞有机会与骨髓瘤细胞实现融合，进而形成杂交瘤细胞。该步骤宛如一场细胞层面的 “联姻”，融合后的杂交瘤细胞继承了双亲细胞的关键特性，为后续的筛选及抗体生产提供了可能。​

选择性培养​

此步骤旨在从众多细胞中精准筛选出融合成功的杂交瘤细胞，一般借助 HAT 选择性培养基达成目标。在 HAT 培养基里，未融合的小鼠骨髓瘤细胞面临 “绝境”：其 DNA 的从头合成途径被有效阻断，同时，由于缺乏次黄嘌呤 - 鸟嘌呤 - 磷酸核糖转移酶（HGPRT），无法利用补救途径合成 DNA，如此一来，两个 DNA 合成途径均被堵死，骨髓瘤细胞的 DNA 无法复制，最终走向死亡。未融合的 B 淋巴细胞，尽管拥有次黄嘌呤 - 鸟嘌呤 - 磷酸核糖转移酶，但自身不具备在体外长期存活的能力，也会逐渐凋亡。唯有融合后的杂交瘤细胞，因从 B 淋巴细胞处获得了次黄嘌呤 - 鸟嘌呤 - 磷酸核糖转移酶，可通过补救途径合成 DNA，并且具备骨髓瘤细胞无限增殖的特性，从而能够在 HAT 培养基中顽强存活并持续增殖。这一过程犹如一场严苛的 “生存竞赛”，只有符合特定条件的杂交瘤细胞才能脱颖而出。​

杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化​

在 HAT 培养基中存活并生长的杂交瘤细胞，仅有少数能够分泌预定特异性的单克隆抗体。所以，必须开展筛选和克隆化工作。常用的有限稀释法，是进行杂交瘤细胞克隆化培养的有效手段。通过灵敏、快速且特异的免疫学方法，从众多细胞中精准筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并对其进行克隆扩增。当这些细胞被全面鉴定，包括其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量等关键指标后，需及时对其进行冻存，以确保细胞的特性和功能得以长期保存。这一步骤如同在 “细胞丛林” 中寻觅珍贵 “宝藏”，筛选出符合特定要求的细胞，并妥善保存以备后续使用。​

单克隆抗体的大量制备​

体内诱生法​

选取 BALB/c 小鼠，先腹腔注射 0.5ml 液体石蜡或降植烷进行预处理，这一操作可改变小鼠腹腔环境，利于后续杂交瘤细胞的生长。1 - 2 周后，在小鼠腹腔内接种杂交瘤细胞。此后，杂交瘤细胞在小鼠腹腔内迅速增殖，并持续产生和分泌单克隆抗体。大约 1 - 2 周，可观察到小鼠腹部明显膨大。此时，用注射器抽取腹水，就能收获大量单克隆抗体。该方法利用小鼠体内环境，为杂交瘤细胞提供了良好的生长和抗体生产环境。​

体外培养法​

将杂交瘤细胞放置于培养瓶中进行培养。在培养进程中，杂交瘤细胞会产生并分泌单克隆抗体。收集培养上清液，通过离心去除细胞及其碎片，即可获取所需要的单克隆抗体。不过，这种方法产生的抗体量相对有限。随着科技发展，各种新型培养技术和装置不断涌现，如生物反应器的应用等，大大提高了抗体的生产量，为单克隆抗体的大规模生产提供了可能。​

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