一文看懂 Glutathione Sepharose 4B （货号：17075601）亲和层析填料怎么用！

GLUTATHIONE SEPHAROSE 4B 

在重组蛋白纯化实验中，是否常面临 GST 标签蛋白结合效率低、批量纯化收率不足、填料适配性差等问题？尤其在小规模批量纯化或工艺预实验场景下，需要兼顾效率与灵活性？针对这些需求，Glutathione Sepharose 4B 10mL 亲和层析填料（货号：17075601） 凭借高结合载量、稳定化学性能及灵活适配性，成为 GST 标签蛋白纯化的核心工具，助力实验高效推进。

一、产品核心信息

二、核心技术优势与适用场景

1. 核心技术优势

高载量 + 高收率：结合载量超 25mg/mL，针对样品中 GST 标签蛋白含量较高的实验，可实现一步式高收率纯化，减少蛋白损耗，降低后续检测干扰。

低非特异性吸附：4% 琼脂糖基质亲水性强，搭配环氧活化偶联的谷胱甘肽配基，能特异性结合 GST 标签蛋白，减少杂蛋白非特异性吸附，提升纯化纯度。

灵活适配性：10mL 散装形式可填充至 C、Tricorn、XK、HiScale 等系列空柱，适配注射器、蠕动泵、层析系统等设备；同时可与 GSTrap 4B（预装柱）、GST SpinTrap（离心柱）等产品搭配，满足不同实验操作模式需求。

易储存 + 易维护：4~30℃常温储存即可，无需低温冷藏；pH 稳定性范围宽（4~13），可使用常规缓冲液清洗，降低维护成本。

2. 重点适用场景

小规模批量纯化：适配实验室单次 10mL 填料用量的 GST 标签蛋白纯化，如多个平行样品同步处理。

工艺放大预实验：在大规模 GST 标签蛋白纯化工艺确立前，用于验证缓冲液条件、洗脱参数等，为后续放大提供数据支撑。

GST pull-down 实验：用于捕获 GST 标签融合蛋白，进而研究其与靶蛋白（或 RNA）的相互作用，如解析蛋白互作网络、验证分子结合关系。

三、关键问题解答（FAQ）

Q1：该填料货号 17075601 对应的规格是否为 10mL？与其他规格（如 100mL、300mL）的核心差异是什么？

A：货号 17075601 对应的规格为 10mL，是该系列填料的小规模规格。与 100mL（货号 17075605）、300mL（货号 17075604）相比，核心差异在于用量适配场景：10mL 规格更适合实验室小规模纯化、预实验或样本量较少的实验；大规格则适配大规模生产或高频次批量纯化，三者在结合载量、化学稳定性等核心性能参数上一致。

Q2：纯化过程中选择缓冲液时需注意哪些要点？是否需避免特定成分？

A：缓冲液选择需遵循 “兼容填料 + 保护蛋白活性” 原则：可选用 Tris-HCl、PBS 等常用水溶性缓冲液，无需添加特殊试剂；需避免使用能破坏谷胱甘肽与 GST 结合的强还原剂（如高浓度 DTT）或变性剂（如尿素、盐酸胍），防止目的蛋白结合效率下降；缓冲液 pH 建议控制在 4~13 范围内，与填料 pH 稳定性匹配，避免基质或配基降解。

Q3：使用该填料进行 GST pull-down 实验时，如何优化结合效率？

A：优化结合效率可从三方面入手：① 样本预处理：若为细胞裂解液，建议离心去除沉淀（避免杂质堵塞填料孔隙），可适当加入温和去污剂（如 0.1% Triton X-100）增加蛋白溶解度；② 孵育条件：将样本与填料在 4℃温和振荡孵育 1~2 小时，避免高温导致蛋白变性，同时保障 GST 标签与配基充分结合；③ 平衡步骤：上样前用平衡缓冲液（与样本缓冲液一致）充分平衡填料，确保填料处于适宜结合环境，减少 pH 或离子强度差异对结合的影响。

Q4：填料使用后如何进行清洁与再生，以延长使用寿命？

A：清洁与再生需分两步：① 常规清洗：纯化结束后，用 5~10 个柱体积的平衡缓冲液冲洗填料，去除残留样本；再用 5 个柱体积的 0.5M NaCl 溶液冲洗，减少非特异性吸附的杂蛋白；② 再生处理：若需重复使用，可先用 5 个柱体积的 10mM 还原型谷胱甘肽洗脱液（pH 8.0）冲洗，再用平衡缓冲液平衡至中性；长期储存前，需用 20% 乙醇溶液冲洗，然后置于 4~30℃、20% 乙醇环境中保存，避免微生物污染。

Q5：该填料能否用于纯化带 GST 标签的膜蛋白或疏水蛋白？需注意哪些事项？

A：可用于纯化，但需优化缓冲液体系以提升溶解度：① 需在缓冲液中添加适宜的去污剂（如 CHAPS、DDM），避免膜蛋白或疏水蛋白聚集沉淀；② 可适当提高缓冲液中盐浓度（如 150~300mM NaCl），减少疏水相互作用导致的杂蛋白吸附；③ 上样流速需降低（建议 0.5~1mL/min），延长蛋白与填料的接触时间，保障结合效率；同时需通过预实验验证去污剂对 GST - 谷胱甘肽结合的影响，避免干扰纯化过程。

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