BD 死活染料干货科普

BD 死活染料

在流式细胞术实验中，死细胞的存在会严重干扰数据真实性 —— 它们不仅自发荧光强、非特异性结合抗体，还会导致活化指标假阴性。因此，选择合适的死活染料是流式实验成功的关键一步。BD 生物科学推出的核酸类和胺基类（Fixable Viability Stain，FVS 系列）死活染料，能精准区分活死细胞，相关产品可通过优宁维平台采购，为实验保驾护航。

一、为什么流式实验必须关注细胞活性？

死细胞对实验的干扰主要体现在三个方面：

自发荧光干扰：死细胞自发荧光强，在多个荧光通道呈现对角线假阳性，模糊阳性细胞群边界；

非特异性结合增加：死细胞细胞膜破裂，会额外结合抗体，导致背景信号升高，甚至掩盖弱阳性目标群；

功能指标失真：死细胞无法正常激活信号通路，若不排除会导致活化型指标（如磷酸化蛋白）假阴性。

常规实验操作（离心、洗涤）会产生少量死细胞，而临床样本（如病人血液）、组织制备细胞悬液、长期培养细胞的活性本就较差，因此流式实验建议必加死活染料。

二、BD 死活染料的两类核心选择

BD 死活染料分为核酸类和胺基类（FVS 系列），两者原理、操作和适用场景差异明显，可根据实验需求选择。

（一）核酸类死活染料：PI、7-AAD、DAPI

染色原理：细胞膜不通透的核酸荧光染料，死细胞因膜不完整被染色，与 DNA/RNA 可逆结合。

操作步骤：

完成表面染色后，取 1×10⁶细胞，加入 100μl 细胞悬液；

加入对应染料（如 7-AAD 加 5μl，PI 加 10μl，DAPI 加 0.5~2μl），轻摇混匀；

避光室温孵育 5 分钟，1 小时内上机检测。

注意事项：

仅适用于不固定细胞，固定后细胞膜通透性改变会导致活细胞也被染色；

染色后避免洗涤、剧烈涡旋，否则染料易脱落；

需 4℃保存，不可冻存。

优宁维可采购的代表产品：

PI（货号 556463），检测通道 PE/PE-CF594，适配 Blue/YG 激光；

7-AAD（货号 559925），检测通道 PerCP/PerCP-Cy5.5，适配 Blue/YG 激光；

DAPI（货号 564907），检测通道 BV421/BUV，适配 UV/Violet 激光。

（二）胺基类染料：BD Fixable Viability Stain（FVS 系列）

染色原理：细胞膜不通透的氨基荧光染料，与死细胞内游离胺共价结合（不可逆），活细胞仅表面少量结合，呈弱阳性。

核心优势：

可用于固定后胞内染色（如细胞因子、磷酸化蛋白检测），这是核酸类染料不具备的；

荧光选择丰富，适配多色流式实验；

染色后稳定性强，不影响后续固定破膜流程。

操作步骤（以 Fixable Viability Stain 520 为例，货号 564407，优宁维有售：

用细胞培养级 DMSO 溶解染料粉末（如 FVS 520 用 340μl DMSO 溶解，至少可用 340 次），分装后 - 20℃保存，避免反复冻融；

用不含血清的 1×DPBS 清洗细胞一次，并重悬为 1-10×10⁶个细胞 /ml；

按 1:1000 比例加入溶解后的 FVS 染料（每 1ml 细胞悬液加 1μl 染料），涡旋混匀；

避光室温孵育 10-15 分钟（或 37℃孵育 5-7 分钟、2-8℃孵育 30-60 分钟）；

用含 1-2% 血清的 PBS 洗涤两次，后续按常规流程进行表面染色、固定破膜、胞内染色。

优宁维可采购的 FVS 系列代表产品：

Fixable Viability Stain 520（货号 564407），检测通道 FITC/AF488，适配 Blue 激光；

Fixable Viability Stain 575V（货号 565694），检测通道 BV605/Qdot605，适配 Violet 激光；

Fixable Viability Stain 700（货号 564997），检测通道 AF700，适配 Red 激光

三、染料选择与荧光搭配建议

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