美天旎磁珠分选 T 细胞：注意事项与 CD3/CD4/CD8/Treg 分选流程

T 细胞是免疫系统的核心功能细胞，其亚群（CD3 + 总 T 细胞、CD4+T 辅助细胞、CD8 + 细胞毒性 T 细胞、CD4+CD25 + 调节性 T 细胞 / Treg）的精准分离，是免疫机制研究、肿瘤免疫治疗、自身免疫病机制探索等领域的基础。磁珠分选技术因操作简便、细胞活性高、特异性强，成为 T 细胞分选的主流方法，其中美天旎（Miltenyi）磁珠系统凭借成熟的抗体 - 磁珠偶联技术和灵活的分选策略，成为科研人员的工具。

一、美天旎磁珠分选 T 细胞：实验前后关键注意事项

磁珠分选的得率与纯度，取决于每一步的细节控制。以下从 “分选前准备”“分选中操作”“分选后处理” 三个阶段，梳理不可忽视的关键点：

1. 分选前：做好 3 项核心准备，避免源头误差

样本预处理：保证细胞活性与单细胞状态

起始样本（如人外周血 PBMC、小鼠脾脏单细胞悬液）需满足两个条件：① 细胞活率≥85%（活率过低会导致磁珠非特异性结合死细胞，降低纯度），可通过台盼蓝染色检测，若死细胞过多，建议用美天旎死细胞去除磁珠（如 #130-109-398）预处理；② 无细胞团块，需用 70μm 细胞筛网（如 #130-098-462）过滤，避免堵塞分选柱。

例：人 PBMC 制备时，建议用密度梯度离心（如 Lymphoprep™）去除红细胞和血小板，减少杂质干扰。

磁珠与分选柱：匹配样本类型与分选策略

根据目标细胞（人源 / 鼠源）、分选策略（阳性 / 阴性）选择适配磁珠：

人源 T 细胞：优先选择美天旎人源特异性磁珠（如 CD4、CD8 磁珠）；鼠源 T 细胞需选择鼠源抗体磁珠（如抗鼠 CD3、CD25 磁珠）；

分选柱选择：小样本（≤2×10⁸总细胞）用 MS 柱，大样本（≤2×10⁹总细胞）用 LS 柱， depletion（去除非目标细胞）用 LD 柱，具体需参考磁珠说明书（如优宁维供应的美天旎产品均附详细适配指南）。

缓冲液：提前配置并预冷，避免气泡

常用分选缓冲液为 “含 0.5% BSA + 2mM EDTA 的 PBS”（pH 7.2），配置后需真空抽滤去除气泡（气泡会堵塞分选柱，导致分选失败）；也可直接使用美天旎专用缓冲液（如 autoMACS Running Buffer #130-091-221）。所有缓冲液需提前 4℃预冷，减少细胞活性损失。

2. 分选中：把控 2 个关键操作，提升纯度与得率

孵育条件：严格控制温度与时间，避免非特异结合

磁珠与细胞孵育时，需遵循 “低温短时” 原则：① 孵育温度多为 2-8℃（常温会增加抗体非特异结合）；② 孵育时间 10-20 分钟（具体参考说明书，延长时间会导致杂质细胞结合磁珠）；③ 孵育过程中需轻轻颠倒离心管 3-5 次，确保磁珠与细胞充分接触，但避免剧烈震荡损伤细胞。

过柱与洗柱：避免残留，保证分离彻底

① 上柱前：用 1mL 缓冲液润洗分选柱，确保柱内无气泡；细胞悬液需缓慢加入柱底（避免沿管壁流入导致残留）；

② 洗柱：待柱内液体完全流尽后，再加入缓冲液（每次 1-2mL，共 2-3 次），彻底洗去未结合磁珠的杂质细胞；

③ 洗脱目标细胞：阳性分选时，将分选柱从磁场中取出，用 3mL 缓冲液快速洗脱；阴性分选时，直接收集流出液即可（流出液为未被磁珠标记的目标细胞）。

3. 分选后：2 步处理，保障细胞可用于下游实验

细胞回收与活性检测

洗脱后的细胞需 1500rpm 离心 5 分钟，弃上清后用培养基（如 RPMI 1640）重悬，再次检测活率（建议活率≥90%），若活率过低，需排查孵育温度或缓冲液是否合格。

避免磁珠残留（针对阳性分选）

若后续实验（如流式检测、细胞活化）对磁珠残留敏感，可使用美天旎 REAlease 磁珠（分选后可酶解去除磁珠），或用缓冲液多洗涤 1 次，减少残留。

二、美天旎磁珠分选热门 T 细胞亚群：流程详解（人源 + 鼠源）

以下针对 4 类核心 T 细胞亚群，结合美天旎经典方案与优宁维供应的产品，拆解分选流程，覆盖阳性、阴性、顺序分选策略。

1. CD3 + 总 T 细胞：人源 / 鼠源通用阳性分选

适用场景：需快速获取总 T 细胞（如 T 细胞活化实验、细胞因子检测），目标细胞表面 CD3 抗原特异性高，适合阳性分选。

核心流程（以人 PBMC 为例）：

1,样本处理：将人 PBMC 用分选缓冲液重悬至 1×10⁸细胞 /mL，取 5×10⁷细胞（约 500μL）至离心管；

2,磁珠结合：加入 25μL 美天旎人 CD3 磁珠，轻轻混匀，2-8℃孵育 15 分钟；

3,洗细胞：加入 2mL 缓冲液，350×g 离心 8 分钟，弃上清，用 1mL 缓冲液重悬；

4,过柱分选：将 MS/LS 柱装在磁分离器上，用 1mL 缓冲液润柱；加入细胞悬液，待流尽后，用 2×3mL 缓冲液洗柱；

5,洗脱回收：取下分选柱，加入 3mL 缓冲液，用活塞推出细胞，离心后重悬即可。

鼠源适配：更换为美天旎鼠 CD3 磁珠，样本替换为小鼠脾脏单细胞悬液，流程一致。

2. CD4+T 辅助细胞：人源阴性分选（未接触型细胞）

适用场景：下游实验需避免目标细胞被磁珠标记（如 T 细胞活化、亚群再分选），选择阴性分选（去除非 CD4 + 细胞），推荐使用优宁维供应的美天旎 CD4+ T Cell Isolation Kit。

产品链接与核心信息：

产品名称：CD4+ T Cell Isolation Kit, human

货号：130-096-533

产品链接：CD4- T Cell Isolation Kit- human_Miltenyi_优宁维(univ)商城https://www.univ-bio.com/cd4/130-096-533.html?mk_channel=seo

核心优势：针对人 PBMC，通过 “生物素抗体混合物标记非 CD4 + 细胞（如 CD8+、CD14+、CD19 + 细胞）+ 磁珠捕获去除”，获得未接触型 CD4+T 细胞，protocol 优化后操作时间缩短，纯度可达 95% 以上。

核心流程：

1,样本处理：人 PBMC 用缓冲液重悬至 1×10⁸细胞 /mL，取 1×10⁹细胞（试剂盒最大处理量）；

2,非目标细胞标记：加入试剂盒中的 “生物素抗体混合物”，2-8℃孵育 10 分钟；

3,磁珠结合非目标细胞：加入 “CD4+T 细胞磁珠混合物”，2-8℃孵育 15 分钟；

4,过柱去除非目标细胞：将 LS 柱润洗后，加入细胞悬液，收集流出液（流出液即为未被标记的 CD4+T 细胞）；

5,纯化：用 3×3mL 缓冲液洗柱，收集所有流出液，离心后重悬，用于后续实验（如 naive CD4+T 细胞分选、T 细胞极化）。

3. CD8 + 细胞毒性 T 细胞：人源阳性 / 阴性双策略分选

适用场景：需获取高纯度 CD8+T 细胞（如肿瘤杀伤实验、病毒感染研究），可根据下游需求选择阳性或阴性分选，推荐优宁维供应的美天旎 CD8 MicroBeads。

产品链接与核心信息：

产品名称：CD8 MicroBeads, human

货号：130-045-201

产品链接：

核心优势：支持阳性分选（直接捕获 CD8 + 细胞） 或阴性分选（去除非 CD8 + 细胞） ，适用于人外周血、脐带血、淋巴结、脾脏等多种样本，分选后细胞活性高，可用于细胞毒性实验、HIV 感染研究等。

核心流程（阳性分选为例）：

1,样本处理：人外周血 PBMC 用缓冲液重悬至 1×10⁸细胞 /mL；

2,磁珠结合：每 1×10⁷细胞加入 10μL CD8 磁珠，轻轻混匀，2-8℃孵育 20 分钟；

3,过柱分选：MS 柱润洗后，加入细胞悬液，流尽后用 2×2mL 缓冲液洗柱；

4,洗脱回收：取下分选柱，加入 3mL 缓冲液推出细胞，离心后重悬，纯度可达 90% 以上。

4. CD4+CD25+Treg：顺序分选（先阴选后阳选）

适用场景：Treg 细胞占 CD4+T 细胞比例低（约 5-10%），需通过 “顺序分选” 先富集 CD4+T 细胞，再分选 CD25 + 细胞，保证纯度与得率。

核心流程（人源为例）：

1,第一步：阴性分选获取 CD4+T 细胞

使用美天旎 CD4+ T Cell Isolation Kit（货号 130-096-533，优宁维供应），按前文 CD4+T 细胞流程，去除非 CD4 + 细胞，获得纯 CD4+T 细胞；

2,第二步：阳性分选获取 CD4+CD25+Treg

将 CD4+T 细胞用缓冲液重悬至 1×10⁷细胞 /mL，加入人 CD25 磁珠（如美天旎 #130-092-983），2-8℃孵育 15 分钟；

用 MS 柱过柱，洗柱后洗脱，得到 CD4+CD25+Treg；

下游应用：可用于 Treg 抑制功能检测、自身免疫病机制研究等。

三、总结：美天旎磁珠分选 T 细胞的核心优势与资源获取

美天旎磁珠分选 T 细胞的核心优势在于 **“特异性强（抗体 - 抗原精准结合）、细胞友好（温和分离，活性≥90%）、灵活适配（支持不同亚群与样本类型）”** ，而实验成功的关键在于 “细节控制”—— 从样本预处理到孵育、过柱，每一步都需遵循标准流程。

若需获取文中提及的美天旎 CD4+T 细胞分选试剂盒（130-096-533）、CD8 磁珠（130-045-201）或其他 T 细胞分选工具，可通过优宁维官方平台查询详情：优宁维作为专业的生命科学试剂供应商，提供合规的品牌产品、详细的技术说明书及实验支持，助力科研人员高效完成 T 细胞分选实验。

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