PCR 技术入门：荧光定量 PCR 原理

PCR，全称聚合酶链式反应，是分子生物学领域的 “革命性技术”—— 它能在体外快速扩增特定 DNA 片段，就像一台 “DNA 复印机”，让微量的靶基因片段在短时间内复制数百万甚至数十亿份，从而实现对目标基因的检测、定量和分析。

而荧光定量 PCR（qPCR）是 PCR 技术的升级版本，在扩增过程中加入荧光信号物质，实时监测扩增进度，不仅能判断目标基因是否存在，还能精准计算其初始浓度。如今，qPCR 已广泛应用于基因表达分析、病原体检测、基因突变筛查、miRNA 研究等科研场景，成为科研人员的 “必备工具”。

做好 qPCR 实验，核心在于选择适配的试剂盒。下面结合两种主流 qPCR 技术，介绍两款 Absin（爱必信）的高性价比试剂盒，帮你快速匹配实验需求。

一、荧光定量 PCR 的两种核心技术：探针法 vs 染料法

qPCR 的荧光检测主要分为两种思路，适用场景各有侧重：

探针法：通过特异性探针与靶基因结合释放荧光，特异性极高，适合复杂样本（如土壤、粪便、血液）中低丰度靶基因的检测，能有效避免非特异扩增干扰；

染料法：使用荧光染料（如 SYBR Green I）嵌入 DNA 双链发光，操作简单、成本较低，适合常规基因定量、miRNA 扩增等场景，尤其适合新手入门。

两款试剂盒分别对应这两种技术，且都搭载了化学修饰的热启动聚合酶，从源头降低非特异扩增风险，保证实验稳定性。

二、核心试剂盒推荐 1：探针法荧光定量 PCR 试剂盒（货号：abs60305）

产品核心优势

这款试剂盒是复杂样本检测的 “利器”，凭借高特异性、快速度和强抗干扰能力，成为科研中靶基因定量的热门选择：

特异性拉满：采用化学修饰的热启动聚合酶，需高温激活才能发挥作用，有效避免低温下的非特异结合，减少引物二聚体等干扰；

快速高效：反应缓冲液经过多轮优化，与聚合酶完美适配，40 个扩增循环仅需 20 多分钟，大幅缩短实验周期；

灵敏度与抗干扰兼具：20μL 反应体系中，仅需几个拷贝的 DNA 分子就能被检测到；同时抗干扰能力强，可直接用于土壤、粪便、肿瘤组织、血液等复杂来源样本的靶基因分析；

操作便捷：试剂以预混液（Super Probe Master Mix）形式包装，包含 dNTP Mix、Mg²⁺、热启动聚合酶、荧光保护素等核心组分，无需单独配制，直接加样即可。

关键技术信息

产品链接：探针法荧光定量PCR试剂盒_Absin_优宁维(univ)商城

反应体系与条件：① 引物终浓度推荐 0.2μM（可在 0.1-1.0μM 调整），探针终浓度 0.15-0.30μM；② 模板体积不超过反应体积的 10%，建议适度稀释避免抑制；③ 扩增产物长度优选 100-200bp（范围 100-500bp）；④ 标准反应条件：95℃ 5 分钟（激活聚合酶）→ 95℃ 5-15 秒 → 60℃ 30-35 秒（35-40 个循环）；

保存方式：-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期 12 个月；

注意事项：所有组分无核酸酶残留，仅用于科研；单次使用量较少时，建议小份分装保存。

三、核心试剂盒推荐 2：miRNA 茎环染料法荧光定量 PCR 试剂盒（货号：abs60270）

产品核心优势

专为 miRNA 定量设计，采用 SYBR Green I 嵌合荧光法，搭配茎环引物技术，解决 miRNA 片段短、易非特异扩增的痛点：

特异性强：热启动聚合酶 + 茎环引物设计双重保障，有效避免引物二聚体和非特异扩增，精准靶向 miRNA；

灵敏度高：优化后的反应缓冲液提升 PCR 扩增效率，荧光信号更强，灵敏度优于同类产品，适合低丰度 miRNA 检测；

科研助力升级：购买即免费提供上下游引物设计和序列信息，无需自行摸索，大幅提升实验成功率；

试剂盒组成完整：包含 2× miRNA SYBR Mastermix、Tag Primer、ddH₂O，200T 规格可满足多次实验需求，无需额外搭配基础试剂。

关键技术信息

产品链接：miRNA茎环染料法荧光定量PCR试剂盒_Absin_优宁维(univ)商城

反应体系与条件：① 引物终浓度推荐 0.2μM（可在 0.1-1.0μM 调整）；② 未稀释 cDNA 模板加样体积不超过 2.0μL，高丰度 miRNA 可根据 CT 值适当稀释；③ 优化扩增条件（3 段法）：95℃ 10 秒 → 60℃ 20 秒 → 70℃ 20 秒（收集荧光信号）；

保存方式：-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期 12 个月；

注意事项：操作和保存需避免强光照射；配制反应体系时轻柔混匀，防止气泡产生。

四、qPCR 实验关键注意事项

1，防污染是底线：qPCR 灵敏度极高，气溶胶污染会导致假阳性，所有操作需在超净台中进行，使用专用枪头和离心管；

2，模板质量影响结果：确保模板无蛋白酶、核酸酶污染，浓度均匀，避免因模板降解或浓度过高 / 过低导致扩增异常；

3，反应条件灵活调整：根据引物 Tm 值、目标片段长度调整退火温度和延伸时间，复杂样本可适当优化循环数；

4，试剂保存要规范：两款试剂盒均需 - 20℃避光保存，反复冻融会破坏酶活性和荧光物质，建议小份分装使用。

总结

PCR 技术的核心价值在于 “精准扩增与定量”，而选择一款适配的试剂盒，能让实验事半功倍。Absin 的两款荧光定量 PCR 试剂盒，分别针对通用靶基因（探针法）和 miRNA（染料法）场景，凭借高特异性、高灵敏度和便捷操作，已被广泛应用于各类科研项目（产品引用文献≥17500 篇）。无论你是开展复杂样本的靶基因检测，还是专注于 miRNA 的表达分析，都能找到合适的解决方案，助力科研数据更可靠、实验效率再提升。

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