PfAgo 核酸内切酶科普：原理、应用

一、PfAgo 核酸内切酶是什么？

PfAgo 全称为Pyrococcus furiosus Argonaute，是来源于激烈火球菌（Pyrococcus furiosus）的热稳定核酸内切酶，属于 Argonaute（Ago）蛋白家族。该酶通过基因工程技术在重组大肠杆菌中表达纯化，是分子生物学研究、核酸检测领域的重要工具酶。

二、PfAgo 核酸内切酶的工作原理

PfAgo 的核心功能依赖引导 DNA（guide DNA）与靶核酸的碱基互补配对：

1，引导 DNA 与靶核酸（以单链 DNA 为主，对单链 RNA 也有一定活性）发生碱基互补配对，形成特异性结合；

2，PfAgo 激活核酸内切酶活性，对靶核酸进行特异性剪切；

3，剪切过程不受靶标序列、剪切位点相邻序列的限制，可灵活设计引导序列。

此外，PfAgo 具有极强的热稳定性，95℃孵育 1 小时后酶活性无损失，适配高温反应体系。同时，PfAgo 剪切靶标核酸产生的产物，可作为新生的次级引导 DNA，为高灵敏度核酸检测技术提供基础。

PfAgo 核酸内切酶体外切割活性验证电泳图

下图为 PfAgo 核酸内切酶的体外切割实验结果，直观验证其剪切活性：

M：核酸 Marker，标注了 16 nt、25 nt、35 nt、50 nt、60 nt 的核酸条带，用于判断核酸片段长度；

Control 组：未添加 PfAgo，仅存在 60 nt 的靶标 DNA（Target）条带，无剪切产物；

PfAgo 组：添加 PfAgo 后，60 nt 靶标 DNA 被有效剪切，产生 35 nt、25 nt 的剪切产物（product），同时保留 16 nt 的引导 DNA（guide），证明 PfAgo 的高效特异性剪切活性。

三、PfAgo 核酸内切酶的核心应用场景

1，高灵敏度核酸检测（RADAR 技术）

基于 PfAgo 的次级剪切作用，可建立 RADAR（Renewed gDNA Assisted DNA cleavage with Argonaute）核酸检测技术。该技术结合等温扩增（如 LAMP），可实现 aM 级别的超灵敏核酸检测，适用于病毒、病原体等微量核酸的检测；同时可发挥 RADAR 对单碱基差异分型联检的优势，形成一管多重核酸检测新技术，提升检测效率。

2，分子生物学基础研究

用于靶核酸的特异性剪切、基因操作等基础实验，为核酸结构与功能研究提供工具。

3，体外诊断试剂研发

为新型核酸检测试剂的开发提供核心工具酶，助力快速、精准的诊断技术落地。

四、优宁维自主品牌 PfAgo 核酸内切酶（RADAR 用微球）产品详解

产品基础信息

产品名称：PfAgo 核酸内切酶（RADAR 用微球）

货号：abs60370-50T

产品链接：

产品概述

PfAgo 核酸内切酶（PfAgo Endonuclease ）来源于重组大肠杆菌，含有从激烈火球菌（Pyrococcus furiosus）中克隆的 Argonaute（Ago）核酸酶基因，是一种依托引导序列（guide DNA）与靶核酸碱基互补配对，继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。

产品核心优势

1，高特异性与灵活性：剪切不受靶标序列和剪切位点相邻序列限制，对单链 DNA 靶核酸底物活性较高，对单链 RNA 靶核酸底物也有一定活性；

2，超热稳定性：95℃孵育 1 小时，酶活性无损失，适配高温反应体系；

3，适配 RADAR 检测体系：可建立高灵敏度、高特异性的 RADAR 核酸检测新技术，兼容不同的等温扩增试剂体系；经优化后形成 “LAMP-RADAR 一管式” 成熟试剂体系，可实现 aM 级病毒基因检测，支持单碱基差异分型联检、一管多重核酸检测；

4，严格质控保障：无 RNase、核酸内切酶 / 外切酶残留，大肠杆菌基因组残留低于 10 拷贝，保障实验结果的可靠性。

单位定义

在 25 μL 反应体积中，95℃条件下反应 15 min，每分钟催化 0.1 nmol Target DNA 所需的 PfAgo 的蛋白量，定义为 1 个酶活力单位 (U)。

产品组分

体外切割单链 DNA 操作方法

自备材料

1，试剂：无核酸酶水（Nuclease-free H₂O）、引导 DNA（guide DNA）、靶 DNA（target DNA）

2，仪器和耗材：PCR 仪器、金属浴或水浴锅、无 RNase EP 管

反应体系配置（25 μL 标准体系）