细胞治疗药物研发| 细胞因子、Granzyme B

在细胞治疗药物（尤其是CAR-T细胞疗法）的研发与临床应用中，细胞因子和Granzyme B（颗粒酶B）的检测扮演着至关重要的角色，贯穿从药效评估到安全性监测的多个环节。

一、细胞因子检测的应用场景

1， 安全性监测：细胞因子释放综合征（CRS）的早期识别与分级

CRS是CAR-T细胞治疗中最常见且最严重的不良反应，发生率可达80%~90%以上。由活化免疫细胞大量释放炎症因子引发。细胞因子检测是CRS诊断和分级的核心实验室指标。

专家共识建议CAR-T治疗后最低应检测指标：IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-2

检测方法演进：传统以ELISA为主，近年来流式微球阵列技术（CBA）、时间分辨荧光共振能量转移技术（TR-FRET）因标本需求量少、可高通量多指标并行检测、灵敏度高等优势，逐渐成为主流 。

2，药效学评估与疗效预测

细胞因子谱的变化不仅反映毒性，也与疗效相关：

在临床试验中，研究者同时监测IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-16、IL-18、TNF-α、IFN-γ等多种细胞因子，以评估CAR-T细胞活化状态和治疗反应。

研究发现，IFN-γ 与CRS密切相关且主要由CAR-T细胞产生。通过药物或基因编辑（如CRISPR/Cas9）阻断IFN-γ，可在不影响抗肿瘤效果的前提下减少巨噬细胞激活和相关毒性因子（IL-1β、IL-6、MCP-1等）的释放，为优化细胞产品设计提供依据。

图：IFN-γ 调节IL-17A/G-CSF 轴，驱动 CRS 和中性粒细胞减少症.

From：Bailey SR, Maus MV. Fanning the flames: IFN-γ fuels CAR-T inflammation and cytopenia. J Clin Invest. 2026;136(1):e201161. Published 2026 Jan 2. doi:10.1172/JCI201161

3，体外研发阶段的CRS风险评价

在药物早期研发中，需建立体外CRS评价方法。例如，使用CD3抗体（OKT3）±CD28抗体、或PMA+离子霉素刺激PBMC，检测上清中IL-6和IFN-γ的释放水平，以筛选可诱导细胞因子释放的候选药物，评估其CRS风险。

相关细胞因子检测

Human IL-6

THUNDER细胞因子检测是基于双抗体夹心法，标记荧光供体和受体的Human IL-6 抗体Eu-Ab1和FR-Ab2，分别与样品中IL-6结合，产生能量共振转移FRET（615nm），进而产生665nm荧光信号，荧光信号强度与IL-6浓度成正比。全程仅需1h，免洗，可高通量。检测灵敏度高，上限宽。

Human IL-6 检测范围：35 – 30,000 pg/mL

图：Human IL-6 检测原理，流程及标准曲线

Human IFNγ

THUNDER细胞因子检测是基于双抗体夹心法，标记荧光供体和受体的Human IFNγ 抗体Eu-Ab1和FR-Ab2，分别与样品中IFNγ结合，产生能量共振转移FRET（615nm），进而产生665nm荧光信号，荧光信号强度与IFNγ浓度成正比。全程仅需2h，免洗，可高通量。检测灵敏度高，上限宽。

图：Human IFNγ 检测原理，流程及标准曲线

Human IFNγ 检测范围：21 – 30,000 pg/mL

Human TNFα

Human TNFα 检测范围：13–30,000  pg/mL

图：Human TNFα 检测原理，流程及标准曲线

二、Granzyme B检测的应用场景

Granzyme B（颗粒酶B）是细胞毒性淋巴细胞（CTL）和CAR-T细胞发挥杀伤功能的关键效应分子，与穿孔素（Perforin）共同进入靶细胞诱导细胞凋亡，在抗肿瘤免疫中发挥重要作用。

图：CAR T细胞通过三个途径介导肿瘤杀伤：（1）穿孔素和颗粒酶通路：靶向抗原阳性细胞群；（2）细胞因子分泌：使基质细胞敏感化；（3）Fas与FasL通路：靶向抗原阴性细胞群。

From：Benmebarek MR, Karches CH, Cadilha BL, Lesch S, Endres S, Kobold S. Killing Mechanisms of Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cells. Int J Mol Sci. 2019;20(6):1283. Published 2019 Mar 14. doi:10.3390/ijms20061283

Granzyme B检测是CAR-T细胞效价测定（Potency Assay）和放行检测（Release Testing）的重要组成部分：

Granzyme B/穿孔素检测法：通过检测细胞内或分泌到胞外的细胞毒性颗粒，直接反映CAR-T细胞的效应功能。这是FDA/EMA等监管机构认可的CAR-T产品效价评估方法之一 ，确保产品质量符合治疗标准。

表型关联：来源于分选CD8⁺T细胞的CAR-T细胞主要生成IFN-γ、TNF-α、穿孔素和颗粒酶B，其水平与细胞杀伤能力直接相关。

Granzyme B试剂盒性能展示

Human GRANZYME B

THUNDER细胞因子检测是基于双抗体夹心法，标记荧光供体和受体的Human Granzyme B 抗体Eu-Ab1和FR-Ab2，分别与样品中Granzyme B结合，产生能量共振转移FRET（615nm），进而产生665nm荧光信号，荧光信号强度与Granzyme B浓度成正比。全程仅需2h，免洗，可高通量。检测灵敏度高，上限宽。

Human Granzyme B 检测范围：19 – 100,000 pg/mL

图：Human Granzyme B 检测原理，流程及标准曲线

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