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​当你还在用传统方法做单指标IHC的时候，有没有想过，隔壁实验室师兄的IHC结果早已经大升级了！

甚至可能是这样的！

免疫组化双染技术即在一张切片上同时染出两个指标，显示两个相关靶标的空间分布。这使它成为肿瘤免疫学研究中的一项重要技术，在这类研究中，研究者需要确定免疫浸润细胞和癌症细胞的亚群及它们在肿瘤微环境中的相互作用。利用这项技术获取可靠结果主要取决于两个主要因素：首先，抗体必须经过合理验证，确保能特异性地结合到目的靶标上；其次，必须对双染步骤进行优化。

CST提供的用于IHC的抗体经过全面彻底的验证，确保对靶标蛋白的高特异性。因此，使用CST提供的抗体，第一个要求便可满足。本技术说明书将指导您顺利完成优化IHC双染实验步骤的所有必要过程，帮助您满足第二个要求。

技术关键点：

以福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的组织样本中优化PD-L1表达细胞与CD8+ T细胞之间相互作用的实验步骤为例。

1. 将一抗与正确的色原配对

结论：PD-L1和HRP Rabbit/DAB底物搭配，CD8ɑ和AP Mouse/Vector Red搭配可获得更优的双染结果。

2. 确定最佳显色顺序

结论：先用AP Mouse/Vector Red，再用HRP Rabbit/DAB进行检测是最佳顺序。

3. 确定一抗稀释比

结论：方案B更有助于得到最佳的双染效果。

4. 优化最佳显色时间

结论：Vector Red显色3分钟/DAB显色1分钟可得到最佳的双染效果。

CST提供经验证的用于IHC的抗体，这些抗体能够帮助研究者获取生物标志物的表达、定位、相互作用和疾病背景的可靠信息。实验用的检测系统和酶底物均经过严格优化，具有高灵敏度、低背景、高清晰度等优势，全力满足同时区分多个表位的需求。


 

CST已逐步将在传统手工IHC应用中经过验证的抗体，再进一步在Leica®Bond™自动染色仪上进行内部验证，提供优化后的实验方案。而且每一个经过Leica®Bond™验证的抗体实验方案，CST都能提供利用其检测样片的结果，结果图片可直接在CST官网上查看。

CST全自动IHC染色方案的优势：

1. 更方便的自动化试验开发

2. 更稳定的染色实验结果

3. 更快捷地从手动实验平台转换到自动化实验平台

4. 更加节省实验优化过程中的样品和试剂

采用IHC自动化染色方案获得的染色图片


 

CST多重荧光免疫组化（mIHC）是化学显色免疫组化和荧光标记抗体之外的另一种信号检测方式，其应用酪胺信号放大技术（TSA®），可在同一石蜡包埋组织切片中检测5个以上靶标。

TSA技术（Tyramide Signal Amplification™，酪胺信号放大技术）：用这种方法做多重免疫荧光，是利用二抗上带有的HRP（而不是直接偶联荧光素），来催化后续添加入体系的非活性荧光素。荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样

品与荧光素稳定结合。

然后微波处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素还留存在样品上。再换个一抗来第二轮孵育，周而复始。等到所有抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最后去检测结果。

由于每轮体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担心抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。


 

 1. 用于IHC的部分促销产品

2. 用于IF的部分促销产品