MACSelect系统—转染后的明智之选

        德国美天旎公司推出的MACSelect™系统，是一种转染细胞分选系统，可以磁性富集已转染的哺乳动物细胞。无论是原代细胞或难转的细胞系，也不论是贴壁或悬浮细胞，在常规转染后都能分选。高比例的阳性细胞和最小的非转染细胞的背景，增加了下游的分析显著性和可靠性。
与耗时的抗生素筛选相比，使用MACSelect技术，仅需3小时就能挑选出转染阳性细胞。重复的MACSelect挑选，可得到稳定表达的细胞系。温柔的MACS磁珠极小，直径仅有50 nm，对细胞无毒性，不影响细胞功能，还能降解。筛选出的细胞能直接进行功能研究或细胞培养。同时，你也无需改变转染方法。只要加入MACSelect的筛选标志，任何转染方法：电转、磷酸钙、脂质体或核转染都OK。 

         MACSelect是一个聪明的系统。选择标志物共表达在细胞表面，已转染的细胞可通过磁性标记从未转染的细胞中分选出来。所有的pMACS载体编码的表面标志物都删除了胞内domain。使用pMACS载体和表达载体的共转是最简单的MACSelect系统使用方法。当然，也可以把基因克隆到pMACS载体进行单转。

        美天旎提供的筛选标志有三种：CD4、H2-KK、LNGFR。MACSelect 4 系统使用修改的人CD4分子作为选择标志物。它适用于CD4阴性细胞系。MACSelect KK系统使用修改的小鼠MHC I分子H-2KK作为选择标志物。仅有极少的鼠系细胞表达H-2KK，因而其可用于几乎任何哺乳动物细胞。MACSelect LNGFR系统使用的人低亲和度神经生长因子受体(LNGFR)分子经过修改。表达LNGFR分子的细胞有：中枢和外周神经系统细胞，骨髓成纤维细胞，滤泡树突状细胞和一些间充质细胞。因此，载体也有常规和双顺反子两类。
几个小时后，转染后的细胞就被MACSelect磁珠标记上，并通过磁性作用在MACS的柱上进行分离。如果是手动操作，MS或LS柱加MACS分离器就行，如果是高通量的分析，autoMACS将是个不错的选择。

   

图1. MACSelect的步骤
无论你进行功能基因分析、药筛、报告基因检测，还是RNAi，转染都是必不可少的步骤。那么，试试MACSelect吧，3小时筛选出转染细胞，花最少的时间获得最大的结果！
原理：
超顺磁化的μMACSTM微珠与细胞裂解物混合，微珠立即与目的mRNA结合。随后过一个置于MACS分选器中的MACS柱子，磁性标记的mRNA即被分离纯化。逆转录可在同一个柱子中进行。彻底洗涤后，洗脱得到纯的cDNA。如图示：
优点：
出色的敏感性—几个细胞就足够
高纯度—无基因组DNA的污染
高回收率—避免离心、缓冲液去除过程中的损失
可重复性好，结果可靠—一步法cDNA合成可很容易的实现自动化
组分：
1、μMACSTMOligo(dT)微珠
超顺磁化的颗粒—只在磁场中才会有磁性
尺寸很小—直径只有50纳米
2、MACS^®柱子
填充有铁珠，可增强磁场—滞留结合目的mRNA的纳米大小的μMACS微珠
缓冲液由重力作用自然流过，因此不需要离心和缓冲液去除步骤。避免损失
彻底的洗涤过程
优点：高回收率，高纯度
3、MACS^®分选器
MACS^®分选器是永久磁铁。可加热的thermoMACSTM分选器是专为柱中进行如cDNA合成这样的酶反应而设计的。一步法避免了管与管之间移液造成的损失。优点：高回收率

自动化的96孔板进行
该流程可很容易的放大在96孔板上进行，用MultiMACSTM96thermo分选器分选。结合机械加样系统，可以实现整个流程的完全自动化。
不会沉降，极高的反应动力—立即与目的mRNA结合
优点：出色的敏感性—mRNA可从极少的样本中分离出来，甚至单个细胞 
 

手动过程
出色的敏感性—几个细胞就足够
μMACS™mRNA分离试剂盒最多可从107细胞得到全长的，完整的mRNA。即使起始细胞数较少，该磁性微珠为基础的技术仍可保证得到可靠的结果。
由于极小尺寸的微珠（50nm）有极好的反应动力，mRNA分子可立即结合，高纯度的mRNA可成功的从极少的样本中分离。
高纯度
MACS^®技术可实现完全的柱内清洗。可得到优质的mRNA而不会有基因组DNA的污染。
从各种样本中分离mRNA
从多种生物材料中分离得到高品质的mRNA。细胞系、原代细胞以及组织均可。
15分钟即可得到mRNA
从细胞、组织或者血液样本中得到mRNA只要15分钟。再需要75分钟即可得到合成好的并在同一个柱子上纯化好的cDNA。

 

独特的一步法mRNA分离和cDNA合成
不需要把纯化的mRNA从柱上洗脱下来，用μMACS™One-step cDNA试剂盒和thermoMACSTM分选器，cDNA合成可直接在柱上进行。该分选器是永久磁铁，可被加热到37℃或者42℃
五个细胞就足够PCR分析
革命性的柱内cDNA合成大大的降低了mRNA和cDNA的损失。使用高效的逆转录酶，磁性标记的mRNA直接在柱内逆转录。第一链合成后，不需要的组分被洗掉而cDNA留在柱内。

这项独特的技术在每个步骤如mRNA分离、cDNA合成和纯化都在同一个柱内进行，最大限度的保留了样本。因此，当起始样本数很小，如只有五个细胞时，仍然可得到可靠的cDNA合成。
   

 
自动化的96孔板mRNA分离
      进行多样本PCR筛选，用于mRNA分离的MACS^®技术可被放大到96孔板的形式。
      MultiMACSTMmRNA分离试剂盒结合MultiMACS 96分选器。这是一个台式设备，有一个96孔的磁铁，只需要45分钟，可直接从细胞和组织中平行的进行多样本的mRNA纯化。
MultiMACS 96分选器可手动操作或者结合机械加样系统自动操作
  
高度可靠性和可重复性
      使用MultiMACS™mRNA分离试剂盒和MultiMACSTMcDNA合成试剂盒，mRNA和cDNA的产出和品质批间差很小
 
自动化的96孔板cDNA合成
      MultiMACS 96分选器同时也有可加热的MultiMACSTM96thermo分选器可供选择，因此一步法mRNA分离和cDNA合成可被放大到完全自动化的，平行的96样本处理。
      MultiMACSTMcDNA合成试剂盒结合MultiMACSTM96thermo分选器可自动化的进行mRNA分离和cDNA合成，并可拥有MACS^®技术的优势：
      一步法—mRNA分离和cDNA合成在同一个柱子中进行及其敏感—五个细胞即足够进行PCR分析高纯度—无基因组DNA污染结果可靠，可重复性高无交叉污染
加液过程不接触样本，没有交叉污染
      MACS技术的里程碑是重力作用下的柱内液流。这并不只是为了省却离心的步骤，同时由于并不需要洗涤步骤后移去缓冲液，因此能做到加液过程不接触样本。从而避免了交叉污染。