中国机长带你搞定细胞因子各类难题

Q1：为什么我看瓶子是空的？

A1：

这是正常现象，请您放心使用。因为在运输过程中，产品可能附着于瓶壁或瓶盖中，因此在重溶前请务必离心。若肉眼还是看不到任何的沉淀，也请放心使用，这是许多蛋白质的正常现象。这是因为在最初的缓冲剂配方中，有些颗粒仅以极少量的材料或透明膜的形式出现。例如，如果产品最初是从溶剂（如乙腈或乙醇）中冻干的，并且不含载体，则可能无法用肉眼检测到沉淀，但这并不意味着样品瓶是空的。所以请严格按照说明书提示重溶，随后可以用分光光度计测试蛋白质浓度。

Q2：怎么重溶冻干粉形式的蛋白？

A2：

（一）室温平衡

小瓶和缓冲液都平衡至室温；

（二）离心

短暂离心小瓶以确保所有冻干物都在瓶子底部（若小瓶不适用于您现有的离心机，您可以把它轻轻地敲下来）；

（三）重溶

①加入说明书中推荐的缓冲液，盖好瓶盖，手动轻微摇晃混匀或用低速摇摆仪器混匀以确保冻干产品彻底溶解（混合时，避免剧烈摇晃、避免枪头吹打或使用涡旋振荡器）；

②粉末应在15-30分钟内完全溶解；

③若溶液中出现薄片和颗粒，请将产品在水平摇床上室温混匀2-3h或4℃过夜。

（四）分装

建议每管体积不少于10ul，且保存过程中避免反复冻融。

Q3：重溶时，一定要使用说明书中推荐的缓冲液吗？

A3：

是的。因为说明书中推荐的重溶浓度和溶剂是厂家经过多次QC摸索出来的，是最有利于蛋白生物活性稳定及充分溶解的体系。

Q4：重溶时，怎么计算需要的缓冲液体积？

A4：

请根据COA推荐的重溶浓度进行重溶，重溶公式为：浓度=质量/体积；

或利用在线计算的小工具，帮您计算。具体方法如下：

①https://www.rndsystems.com/cn/resources/calculators，登陆此网址；

②按照下图提示，输入质量和目标浓度，点击Calculate，即可计算体积。

③也可以根据特定批次分子量计算摩尔浓度

Q5：不同状态的蛋白保质期是否不同？

A5：

是的，收到货起算：

冻干粉保存在-20度到-70度，可保存12个月以上；

重溶后保存在-20度到-70度，可保存3个月；

重溶后保存在2度到8度，可保存1个月

Q6：为什么有的蛋白产品货号后面带CF后缀？我的实验该如何选择合适的蛋白？

A6：

通常为了增强蛋白的稳定性，我们在每1ug的重组蛋白里加50ug BSA装瓶。而含有BSA的蛋白比无载体的同类蛋白（CF）更易溶解和存储，且它们的保质期可能更长。CF代表“无载体”。

因此，如果您用于细胞或组织培养，或作为ELISA标准，我们建议您购买带有BSA的重组蛋白；而如果您做体内实验等BSA会干扰结果的实验，我们建议您购买无载体蛋白。

Q7：重组蛋白或天然蛋白在37°C下的培养半衰期是多少？

A7：

R＆D Systems不能确定培养物中重组蛋白或天然蛋白的半衰期。尽管对于大多数生物而言，细胞与蛋白质的温育期为48-72小时。但是，这并不意味着该蛋白质在整个孵育期间都具有活性。因此需要您摸索和优化具体蛋白的孵育时间。

Q8：为什么某些蛋白需要在酸性缓冲液中重溶？这个缓冲液会伤害细胞吗？

A8：

这是因为一些蛋白在中性pH下具有极强的疏水性，如果不用酸性缓冲液重溶，蛋白则不会完全溶解，并且许多蛋白还可能会附着在小瓶的侧面。而当蛋白用于细胞实验时，可以用培养基（或其他合适的缓冲液）将其稀释至工作浓度，而该缓冲液将中和少量的酸，因此不会伤害细胞。