文献解析|熊果酸通过调节分泌型磷蛋白1介导的Th17细胞分化改善代谢功能障碍相关脂肪性肝病

引言

代谢功能障碍相关脂肪性肝病（Metabolic Dysfunction-Associated Steatotic Liver Disease，MASLD）已成为全球范围内日益严重的健康问题，其发病率与生活方式的变化和全球肥胖率的上升密切相关。MASLD涵盖了从单纯性脂肪变性到代谢功能障碍相关性脂肪性肝炎（Metabolic Dysfunction-Associated Steatohepatitis，MASH），以及伴随的肝纤维化和肝硬化，最终可能导致肝细胞癌（Hepatocellular Cancer，HCC）的发展。鉴于MASLD的严重性和复杂性，寻找有效的治疗方法显得尤为重要。近期，上海中医药大学附属上海市中医医院李勇联合广州中医药大学第一附属医院刘凤斌团队在《Clinical and Molecular Hepatology》上发表了一项重要研究，题为“Ursolic acid targets secreted phosphoprotein 1 to regulate Th17 cells against metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease”，揭示了熊果酸（Ursolic acid）在治疗MASLD中的潜在作用机制。本文将对这一研究进行深度解析。

研究背景

MASLD的发病机制涉及多因素、多途径的复杂网络，其中免疫炎症反应在疾病进展中起着关键作用。Th17细胞作为一类重要的免疫细胞，在MASLD的发病过程中扮演着重要角色。Th17细胞通过分泌IL-17等细胞因子，促进炎症反应，进而加剧肝损伤。因此，调节Th17细胞的分化和功能成为治疗MASLD的潜在策略。

分泌型磷蛋白1（Secreted Phosphoprotein 1，SPP1）是一种多功能细胞外基质磷酸化糖蛋白，具有广泛的生物学功能，包括骨代谢、免疫调节、伤口愈合、细胞存活和肿瘤进展等。近年来，SPP1在免疫调节中的作用逐渐受到关注。研究表明，SPP1能够诱导Th17细胞分化，并维持其免疫炎症状态，从而促进肝星状细胞（Hepatic Stellate Cells，HSCs）的活化，并加速从MASLD到MASH的进展和肝纤维化。因此，SPP1成为治疗MASLD的潜在靶点。

熊果酸是一种天然的五环三萜类化合物，具有多种生物活性，包括抗炎、抗氧化、抗肿瘤等。近年来，熊果酸在治疗代谢性疾病中的潜力逐渐受到关注。本研究旨在探讨熊果酸是否通过调节SPP1介导的Th17细胞分化来改善MASLD的免疫炎症状态。

研究方法

1. 药物靶点芯片与生物信息学分析：利用药物靶点芯片和生物信息学分析，筛选熊果酸对MASLD的潜在治疗作用。
2. 分子对接模拟、表面等离子共振分析、Pull-down实验和免疫共沉淀实验：验证熊果酸与SPP1的直接相互作用。
3. 基因敲除小鼠模型与高脂饮食验证药物疗效：通过基因敲除技术构建SPP1基因敲除小鼠模型，并使用高脂饮食（High-Fat Diet，HFD）验证熊果酸对MASLD的治疗效果。
4. 初始CD4+ T细胞分离与刺激：分离并刺激初始CD4+ T细胞，以进一步验证熊果酸对Th17细胞分化的调节作用。

研究结果

1. SPP1诱导Th17细胞分化：研究发现，SPP1具有诱导Th17细胞分化的能力，并通过放大炎症级联反应，促进MASLD的进展。除了经典的TGF-β/IL-6细胞因子途径外，SPP1还能直接与整合素β1（Integrin β1，ITGB1）和CD44相互作用，通过它们共同的下游细胞外信号调节激酶（Extracellular Signal-Regulated Kinase，ERK）信号通路调节Th17细胞的分化。
2. 熊果酸抑制SPP1的蛋白质活性：研究进一步发现，熊果酸能够显著抑制SPP1的蛋白质活性，从而改善MASLD进展过程中的免疫炎症状态。通过分子对接模拟和表面等离子共振分析，验证了熊果酸与SPP1的直接相互作用。Pull-down实验和免疫共沉淀实验进一步证实了这一结果。
3. 熊果酸改善高脂饮食诱导的小鼠肝组织Th17细胞群：在高脂饮食喂养的小鼠中，肝Th17细胞群显著增加。然而，SPP1基因敲除或熊果酸干预后，这一增加趋势被逆转。流式细胞术和免疫组化染色均一致证明，熊果酸可以剂量依赖性地改善高脂饮食方案诱导的小鼠肝组织中增加的Th17细胞群。
4. 熊果酸调节SPP1/ITGB1/CD44/ERK信号通路：研究还发现，熊果酸通过调节SPP1/ITGB1/CD44/ERK信号通路，抑制Th17细胞的分化。Western blot分析表明，熊果酸的干预显著降低了SPP1、ITGB1和CD44的蛋白水平，同时抑制了小鼠肝组织中ERK的磷酸化状态。

研究结论

本研究揭示了熊果酸在治疗MASLD中的新机制，即通过调节SPP1介导的Th17细胞分化来改善免疫炎症状态。具体而言，熊果酸通过抑制SPP1的蛋白质活性，阻断了SPP1与ITGB1和CD44的相互作用，进而抑制了下游ERK信号通路的激活，从而减少了Th17细胞的分化。这一发现为MASLD的治疗提供了新的思路和方法。

讨论

1. 熊果酸的多功能生物活性：熊果酸作为一种天然的五环三萜类化合物，具有多种生物活性，包括抗炎、抗氧化、抗肿瘤等。本研究进一步证实了熊果酸在治疗MASLD中的潜力，为其在代谢性疾病中的应用提供了新的证据。
2. SPP1作为治疗MASLD的潜在靶点：SPP1在MASLD的发病过程中起着关键作用，通过诱导Th17细胞分化，加剧肝损伤。本研究揭示了SPP1作为治疗MASLD的潜在靶点，为开发针对SPP1的特异性药物提供了理论基础。
3. 熊果酸与SPP1的相互作用：本研究通过分子对接模拟、表面等离子共振分析、Pull-down实验和免疫共沉淀实验等多种方法，验证了熊果酸与SPP1的直接相互作用。这一发现为理解熊果酸的药理作用机制提供了新的视角。
4. 未来研究方向：虽然本研究揭示了熊果酸在治疗MASLD中的新机制，但仍需进一步的研究来验证其临床疗效和安全性。此外，还需要探索熊果酸与其他药物的联合应用，以提高MASLD的治疗效果。

总结

本研究通过深入探索熊果酸在治疗MASLD中的潜在作用机制，揭示了其通过调节SPP1介导的Th17细胞分化来改善免疫炎症状态的新途径。这一发现为MASLD的治疗提供了新的思路和方法，为开发针对MASLD的特异性药物提供了理论基础。未来，随着对熊果酸药理作用机制的进一步深入研究和临床试验的开展，相信熊果酸将成为治疗MASLD的有效药物之一。