罗工秘籍21——T细胞培养及分化的实验要点小结

最近碰到不少老师在做T细胞的培养和诱导分化，但是苦于缺乏文献或者缺乏经验，导致实验结果总是不那么理想，于是专门做了这期内容，帮助大家梳理T细胞培养或分化的实验流程，希望能够对大家有所帮助；）

一般来说，T细胞培养分化的整体流程大致如下：

首先是得到待培养/分化的母体T细胞，这类细胞的获得我们往往通过分选富集的方式来完成，例如要获得足够多的Treg细胞，可以采用分选naïve T细胞然后定向分化扩增为Treg细胞的方式，亦可使用直接分选Treg细胞，直接进行扩增的方式来完成，两个方式的具体分选富集的细胞以自己的目的为主，如果是单纯获得足够多的Treg细胞两者皆可，如果是希望获得特异性的Treg细胞则更推荐后者。

待分选富集到足够多的待培养细胞后，我们就要着手配置我们的培养扩增体系了。这里分享一个我常用的培养扩增及分化体系：

具体的培养扩增分化所需的细胞因子及功能抗体剂量如下表所示：

需要注意的是，标绿的中和抗体有助于Th细胞的进一步分化，并阻断不正常的分化方向，但是并不是说是必需的，在分化效果良好的情况下可以酌情考虑不用。

另外，不论任何分化体系都需要有CD3/CD28/IL-2的参与，这3者是T细胞增殖的基本功能抗体和细胞因子，一定是不可或缺的。

当我们准备好培养扩增体系后，就可以着手准备细胞的培养了，以单纯培养扩增T细胞为例，其大致流程如下：

1. 磁珠分选前一天准备培养孔板，Anti-CD3在1640培养基（不含血清）中稀释为10~25µg/ml。100µl/孔 （48孔板）。4℃ 过夜。
2. 磁珠分选，得到T细胞（或CD4T/CD8T/Th/Treg都可以），将细胞以1*10e5的数量分别种于包被好CD3的孔板中，洗去孔板中昨天剩余的多余液体，每孔加入500ul 1640培养基 在总加样体积的细胞悬液中，推荐继续加入下列细胞因子与抗体：Anti-CD3（5ug/mL），Anti-CD28（1ug/mL），IL-2（10ng/mL）
3. 2天后，换液（如长的太好，则一孔分为3孔（还是要提前包CD3）），不必离心，补加Anti-CD28（1ug/mL），IL-2（10ng/mL）（溶于含10%FBS的培养液）刺激继续培养2-3天。
4. 达到足量细胞后进行后续实验。

如上就是整个T细胞培养及分化的实验步骤参考了，如果看完之后仍然有问题的老师欢迎随时留言沟通~ 当然，我也总结了整个流程中需要用到的耗材和试剂，希望能够帮助到大家：

12~24孔板，1640培养基(有条件上商品化的T细胞培养基（例如美天旎或lonza的，效果更好细胞不容易死)，双抗（有必要的话）

相关功能抗体和细胞因子信息(人)：

相关功能抗体和细胞因子信息(小鼠)：