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罗工流式秘籍22 :可以用流式进行多因子定量检测啦
人阅读 发布时间:2021-09-24 10:10
Q:哎呀,师姐,我最近流式的T细胞分型都做的差不多了,但是还想测下白介素那几个细胞因子的浓度去侧面反应下情况,可是我想到Elisa的操作,我就觉得好麻烦啊,简直头大。
A:你那么多个因子为啥不一起检测呢?我最近了解了一个实验方法叫CBA,可以多个指标同时上流式检测,上完机用软件分析一下结果就出来了,挺简单的。
Q:啊,这么优秀?师姐你给我讲下呢
A:优宁维有相关的讲座视频,(插入视频?)来我们一起看一下这个方法具体怎么说的。
流式多因子检测以携带不同荧光强度的微球为载体,同时对微量、液相样本中多种可溶性蛋白成分进行定量分析的流式检测方法,简称CBA。
其原理跟ELISA相似,也是双抗夹心,不过把包被好捕获抗体的96孔板替换为了包被了荧光素和抗体的微球,如下图所示:
虽然原理相似,但是CBA在定性定量的基础之上,可以通过微球上包被的荧光素强度不同来实现多个因子同时检测。
Q:哇师姐,看起来不错哦,我这么多细胞因子要是用CBA一起检测应该很快就可以做完了,这是我做的笔记,你帮我看看这个步骤有什么问题没呀
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制作标准品,准备待检测物
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混合捕获微球
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待检测物与捕获微球共孵育
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PE检测抗体孵育
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避光孵育3H
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流式细胞仪上机检测
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CBA分析软件(FCAP)批量数据分析
A: 嗯,没什么问题,看起来整个CBA的实验流程做下来就4H左右,大大节约了我们的时间哇。
对比起来,CBA的优势还是很明显的:
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质量优秀:稳定性高、准确性好、灵敏度高
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单管多指标:单个标本可同时检测多个指标,样本需要量大大少于ELISA方法
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实验时间短:单次实验时间(<4h)较单次ELISA所需时间短,且操作简便
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自动化定量:每个因子独立标准曲线,软件自动分析结果
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不用做复孔:每种因子收至少300个beads,就相当于重复300次
也有好多文献都用了这个方法呢,看起来挺靠谱,要不我们买个试试?找小优问问去
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